| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 CRISPR技术研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 CRISPR系统的结构 | 第12页 |
| 1.1.2 CRISPR系统的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.3 CRISPR系统的作用机制 | 第13页 |
| 1.1.4 CRISPR系统的应用 | 第13-15页 |
| 1.2 CRISPRI系统的优化与应用 | 第15-17页 |
| 1.3 骨骼肌概述 | 第17-18页 |
| 1.4 骨骼肌卫星细胞研究进展 | 第18页 |
| 1.5 生肌调节因子家族概述 | 第18-19页 |
| 1.6 MyoG基因和Myf6基因研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6.1 MyoG和Myf6概况 | 第19页 |
| 1.6.2 MyoG结构、定位和功能 | 第19页 |
| 1.6.3 Myf6结构、定位和功能 | 第19-20页 |
| 1.6.4 MyoG与Myf6基因间相互关系 | 第20页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 细胞与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 MyoG、Myf6基因CRISPRi干扰载体的构建 | 第22-25页 |
| 2.2.2 细胞的转染及分化 | 第25页 |
| 2.2.3 细胞总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 RNA反转录成c DNA | 第25-26页 |
| 2.2.5 Realtime PCR检测相关基因的表达变化 | 第26页 |
| 2.2.6 Western blot检测相关基因的表达变化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 荧光显微镜检测肌管融合率 | 第27-28页 |
| 2.2.8 统计分析 | 第28页 |
| 2.2.9 技术路线 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-45页 |
| 3.1 牛骨骼肌卫星细胞的分化 | 第29页 |
| 3.2 MyoG、Myf6基因CRISPRi干扰载体的构建 | 第29-31页 |
| 3.2.1 p SPgRNA质粒的单酶切鉴定结果 | 第29-30页 |
| 3.2.2 MyoG、Myf6基因CRISPRi干扰载体测序结果 | 第30-31页 |
| 3.3 MyoG、Myf6基因CRISPRi干扰载体的筛选 | 第31-33页 |
| 3.4 MyoG、Myf6基因CRISPRi干扰载体的Western blot验证 | 第33-34页 |
| 3.5 MyoG、Myf6基因对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响 | 第34-45页 |
| 3.5.1 MyoG基因的干扰对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响 | 第34-37页 |
| 3.5.2 Myf6基因的干扰对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响 | 第37-39页 |
| 3.5.3 MyoG和Myf6基因的同时干扰对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响 | 第39-41页 |
| 3.5.4 MyoG的干扰和Myf6的同时过表达对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响 | 第41-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 CRISPRi技术的干扰效率探讨 | 第45页 |
| 4.2 细胞转染效率对本研究的影响 | 第45页 |
| 4.3 CRISPRi技术的降低脱靶率探讨 | 第45页 |
| 4.4 牛骨骼肌卫星细胞分化期间，MyoG和Myf6的相互关系 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |
