| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语表 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-30页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第18页 |
| 1.2 文献综述 | 第18-29页 |
| 1.2.1 奶牛乳腺炎的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.2 支原体的研究进展 | 第21-26页 |
| 1.2.3 M. bovis诱导乳腺免疫研究进展 | 第26-29页 |
| 1.3 研究目的 | 第29-30页 |
| 2 原代BMECs的提取培养 | 第30-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第30页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第30页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 2.1.4 细胞消化液、培养液及冻存液 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-33页 |
| 2.2.1 BMECs的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.2 BMECs的鉴定 | 第32页 |
| 2.2.3 BMECs的培养 | 第32-33页 |
| 2.2.4 细胞生长曲线的绘制 | 第33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.3.1 BMECs提取结果 | 第33-34页 |
| 2.3.2 BMECs的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.3 BMECs的培养特性 | 第35-36页 |
| 2.3.4 BMECs的生长曲线 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 3 M. bovis感染BMECs模型的建立 | 第38-50页 |
| 3.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 试验主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.2 试验主要仪器及耗材 | 第38页 |
| 3.1.3 主要试剂配方 | 第38-39页 |
| 3.1.4 qPCR相关引物 | 第39页 |
| 3.2 试验方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 牛支原体菌株的准备 | 第39页 |
| 3.2.2 M. bovis生长曲线的绘制 | 第39-40页 |
| 3.2.3 BMECs外源支原体检测 | 第40页 |
| 3.2.4 M. bovis感染BMECs共培养体系建立 | 第40-41页 |
| 3.2.5 细胞活力试验 | 第41页 |
| 3.2.6 mRNA的提取与qPCR试验 | 第41-43页 |
| 3.2.7 数据分析与统计 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-49页 |
| 3.3.1 M. bovis生长曲线 | 第43-44页 |
| 3.3.2 BMECs外源支原体检测 | 第44-45页 |
| 3.3.3 M. bovis与BMECs共培养诱导炎性基因上调 | 第45-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 4 M. bovis触发BMECs活化TLRs的筛选及TLRs交叉对话 | 第50-65页 |
| 4.1 试验材料 | 第50-53页 |
| 4.1.1 试验主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.2 试验主要仪器及耗材 | 第50页 |
| 4.1.3 试验主要试剂配方 | 第50-52页 |
| 4.1.4 qPCR相关引物 | 第52-53页 |
| 4.2 试验方法 | 第53-56页 |
| 4.2.1 牛支原体菌株的准备 | 第53页 |
| 4.2.2 M. bovis感染BMECs共培养体系建立 | 第53页 |
| 4.2.3 mRNA的提取与qPCR试验 | 第53页 |
| 4.2.4 细胞总蛋白的提取与Western blot试验 | 第53-55页 |
| 4.2.5 免疫共沉淀 | 第55页 |
| 4.2.6 数据分析与统计方法 | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-64页 |
| 4.3.1 正常BMECs表达TLRs | 第56页 |
| 4.3.2 M. bovis感染BMECs后关键TLRs的筛选 | 第56-62页 |
| 4.3.3 TLRs之间的交叉对话 | 第62-64页 |
| 4.4 小结 | 第64-65页 |
| 5 M. bovis诱导BMECs产生炎性信号通路的解析 | 第65-71页 |
| 5.1 试验材料 | 第65-66页 |
| 5.1.1 试验主要试剂 | 第65页 |
| 5.1.2 试验主要仪器及耗材 | 第65页 |
| 5.1.3 试验主要试剂配方 | 第65页 |
| 5.1.4 qPCR相关引物 | 第65-66页 |
| 5.2 试验方法 | 第66页 |
| 5.2.1 牛支原体菌株的准备 | 第66页 |
| 5.2.2 BMECs与M. bovis共培养 | 第66页 |
| 5.2.3 mRNA的提取与qPCR试验 | 第66页 |
| 5.2.4 细胞总蛋白的提取与Western blot试验 | 第66页 |
| 5.2.5 NF-κB抑制剂PDTC的应用 | 第66页 |
| 5.2.6 数据分析与统计方法 | 第66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-70页 |
| 5.3.1 M. bovis感染BMECs后TLRs级联信号通路分子的变化 | 第66-68页 |
| 5.3.2 M. bovis感染BMECs后炎性信号通路分子的变化 | 第68-69页 |
| 5.3.3 PDTC对NF-κB信号通路的抑制 | 第69-70页 |
| 5.4 小结 | 第70-71页 |
| 6 讨论 | 第71-77页 |
| 6.1 BMECs的分离培养特性 | 第71-72页 |
| 6.1.1 原代BMECs的提取方法 | 第71页 |
| 6.1.2 原代BMECs的鉴定 | 第71-72页 |
| 6.1.3 原代BMECs的培养 | 第72页 |
| 6.2 M. bovis感染BMECs体外模型的建立 | 第72-73页 |
| 6.2.1 模型的建立 | 第72-73页 |
| 6.2.2 炎性/趋化因子的表达 | 第73页 |
| 6.3 M. bovis感染BMECs引起TLRs的变化以及TLRs的交叉对话 | 第73-75页 |
| 6.3.1 M. bovis感染BMECs引起TLRs的变化 | 第74页 |
| 6.3.2 M. bovis感染BMECs后TLRs之间的交叉对话 | 第74-75页 |
| 6.4 M. bovis感染BMECs触发的炎性信号通路 | 第75-76页 |
| 6.5 三株M. bovis感染BMECs引起免疫反应的差异 | 第76-77页 |
| 7 结论 | 第77-79页 |
| 本研究的创新特色与不足 | 第79-80页 |
| 进一步工作的建议/设想 | 第80-81页 |
| 硕士期间发表文章 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
