| 摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-23页 |
| 1. 肿瘤的靶向基因-病毒治疗发展概况 | 第18页 |
| 2. 溶瘤腺病毒的发展概况及改造策略 | 第18-20页 |
| 3. microRNA 简介 | 第20-21页 |
| 4. Let-7 在肿瘤方面的研究进展 | 第21页 |
| 5. 基于microRNA 调控的溶瘤病毒研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 基于microRNA 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺病毒的构建与制备 | 第23-43页 |
| 1. 材料方法 | 第23-26页 |
| ·实验载体及试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·所需引物 | 第25-26页 |
| 2 载体构建步骤及方法 | 第26-36页 |
| ·载体构建步骤（流程示意图见附录一） | 第26页 |
| ·腺病毒穿梭载体pXC1-MIRT 的构建及鉴定 | 第26-28页 |
| ·携带let-7 靶位点核苷酸序列的克隆载体pXC-let-7T 的构建及鉴定 | 第28-30页 |
| ·携带let-7 靶位点突变核苷酸序列的克隆载体pXC-let-7MT 的构建及鉴定.. | 第30-32页 |
| ·293 细胞培养 | 第32页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad5/11-Let-7T、Ad5/11-Let-7MT 的重组及鉴定 | 第32-34页 |
| ·病毒扩增 | 第34页 |
| ·氯化铯密度梯度离心法纯化病毒 | 第34-35页 |
| ·5096组织培养感染剂量法（TCID50）测定病毒滴度 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-41页 |
| ·腺病毒穿梭载体pXC1-MIRT 的构建 | 第36-37页 |
| ·携带let-7 靶位点核苷酸序列的克隆载体pXC1-let-7T 的构建 | 第37-38页 |
| ·携带let-7 靶位点突变核苷酸序列的克隆载体pXC1-let-7MT 的构建 | 第38-39页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad5/11-Let-7T、Ad5/11-Let-7MT 的重组及鉴定 | 第39-41页 |
| ·大量扩增后测定病毒滴度 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 基于microRNA 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺病毒治疗肝癌的体外实验 | 第43-67页 |
| 1 实验材料 | 第43-49页 |
| ·实验质粒 | 第43页 |
| ·实验引物 | 第43-44页 |
| ·实验细胞株 | 第44页 |
| ·实验腺病毒 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44-45页 |
| ·实验仪器设备 | 第45-46页 |
| ·实验溶液的配制 | 第46-49页 |
| 2 实验方法及步骤 | 第49-54页 |
| ·细胞培养 | 第49页 |
| ·qRT-PCR 检测细胞中hsa-let-7a 表达量 | 第49-50页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测let-7 靶序列抑制报告基因的表达情况 | 第50-51页 |
| ·蛋白免疫印迹分析 | 第51-52页 |
| ·qRT-PCR 检测感染病毒后的细胞E1A 基因表达量 | 第52-53页 |
| ·病毒增殖实验 | 第53页 |
| ·荧光显微镜下观察溶瘤腺病毒的增殖情况 | 第53-54页 |
| ·细胞活力检测 | 第54页 |
| 3 实验结果 | 第54-64页 |
| ·qRT-PCR 检测细胞中hsa-let-7a 表达量 | 第54-55页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测let-7 靶序列抑制报告基因的表达情况 | 第55-56页 |
| ·蛋白免疫印迹分析 | 第56-57页 |
| ·qRT-PCR 检测感染病毒后的细胞E1A 基因表达量 | 第57-58页 |
| ·病毒增殖实验 | 第58-59页 |
| ·荧光显微镜下观察溶瘤腺病毒的增殖情况 | 第59-61页 |
| ·细胞活力检测（MTT 法） | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 基于microRNA 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺病毒治疗肝癌的体内实验 | 第67-74页 |
| 1 实验材料 | 第67-68页 |
| ·实验试剂及腺病毒 | 第67页 |
| ·实验仪器设备 | 第67-68页 |
| ·实验动物 | 第68页 |
| 2 实验方法及步骤 | 第68-70页 |
| ·BALB/c 裸鼠肝癌移植瘤模型的建立 | 第68页 |
| ·体内实验 | 第68-69页 |
| ·组织标本取材 | 第69页 |
| ·常规病理检查 | 第69页 |
| ·免疫组化染色检测Hexon 抗原 | 第69-70页 |
| ·统计处理 | 第70页 |
| 3. 实验结果 | 第70-72页 |
| ·裸鼠肝癌Hep38 移植瘤模型的建立 | 第70页 |
| ·瘤内注射PBS、WAd5/11-Let-7T 治疗Hep38 移植瘤疗效观察 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 全文小结 | 第74-77页 |
| 1. 基于microRNA 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺Ad5/11-Let-7T 的构建 | 第74页 |
| 2. 基于microRNA 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺Ad5/11-Let-7T 治疗肝癌的体外实验 | 第74-75页 |
| 3. 基于microRNA 调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺Ad5/11-Let-7T 治疗肝癌的体内实验 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录一 | 第83-87页 |
