| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 英文缩略词表 | 第6-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-15页 |
| 1 疱疹病毒US10基因特点 | 第10-11页 |
| 1.1 基因序列的特点 | 第10-11页 |
| 1.2 US10基因的类型 | 第11页 |
| 2 疱疹病毒US10基因编码蛋白的特点 | 第11-13页 |
| 2.1 US10蛋白的特点 | 第11-12页 |
| 2.2 US10蛋白的细胞定位 | 第12页 |
| 2.4 US10蛋白的功能 | 第12-13页 |
| 2.4.1 α疱疹病毒US10蛋白为病毒的结构蛋白 | 第12页 |
| 2.4.2 β疱疹病毒US10蛋白参与免疫逃避 | 第12-13页 |
| 2.4.3 US10蛋白与SCA2的相互作用 | 第13页 |
| 3 US10基因重组病毒的研究现状 | 第13-14页 |
| 4 选题的目的和意义 | 第14-15页 |
| 第二部分 试验研究 | 第15-37页 |
| 1 试验材料 | 第15-17页 |
| 1.1 载体、菌株、毒株、抗体、质粒、细胞、试验动物 | 第15页 |
| 1.2 主要试剂 | 第15页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第15-16页 |
| 1.4 参考序列 | 第16页 |
| 1.5 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2 试验方法 | 第17-22页 |
| 2.1 DPV US10基因的分子特性分析 | 第17页 |
| 2.1.1 DPV US10基因核苷酸序列生物信息学分析 | 第17页 |
| 2.1.2 DPV US10蛋白氨基酸序列生物信息学分析 | 第17页 |
| 2.1.3 DPV US10基因密码子偏爱性分析 | 第17页 |
| 2.2 DPV US10基因原核表达及其多克隆抗体制备 | 第17-20页 |
| 2.2.1 PCR模板DNA的提取 | 第17页 |
| 2.2.2 US10基因PCR扩增及T克隆的构建 | 第17-18页 |
| 2.2.3 克隆质粒pMD18-T/US10与pET-32a(+)质粒的提取、鉴定 | 第18页 |
| 2.2.4 胶回收和连接 | 第18页 |
| 2.2.5 连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第18页 |
| 2.2.6 表达质粒pET32a(+)/US10的鉴定 | 第18-19页 |
| 2.2.7 重组蛋白的诱导表达 | 第19页 |
| 2.2.8 重组蛋白的鉴定 | 第19页 |
| 2.2.9 重组蛋白的纯化 | 第19页 |
| 2.2.10 免疫方案 | 第19-20页 |
| 2.2.11 琼脂扩散试验检测血清效价 | 第20页 |
| 2.2.12 饱和硫酸铵法粗提抗体 | 第20页 |
| 2.3 DPV体外感染DEF后US10蛋白的亚细胞定位分析 | 第20-21页 |
| 2.3.1 间接免疫荧光法的建立 | 第20-21页 |
| 2.3.2 结果判定 | 第21页 |
| 2.3.3 DPV US10蛋白细胞定位的动态监测 | 第21页 |
| 2.4 DPV体外感染DEF后US10基因的转录时相分析 | 第21-22页 |
| 2.4.1 引物设计及引物特异性检测 | 第21页 |
| 2.4.2 两条标准曲线的制作 | 第21页 |
| 2.4.3 cDNA模版的制备 | 第21-22页 |
| 2.4.4 实时荧光定量PCR | 第22页 |
| 2.4.5 药物抑制实验鉴定基因类型 | 第22页 |
| 3 试验结果 | 第22-33页 |
| 3.1 DPV US10基因的分子特性分析 | 第22-25页 |
| 3.1.1 DPV US10基因核苷酸序列生物信息学分析 | 第22页 |
| 3.1.2 DPV US10蛋白氨基酸序列生物信息学分析 | 第22-24页 |
| 3.1.3 DPV US10基因密码子偏爱性分析 | 第24-25页 |
| 3.2 DPV US10基因原核表达及其多克隆抗体制备 | 第25-27页 |
| 3.2.1 US10基因PCR扩增、克隆质粒及表达质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2.2 重组蛋白的表达、鉴定和纯化 | 第26-27页 |
| 3.2.4 抗体的制备和纯化 | 第27页 |
| 3.3 DPV体外感染DEF后US10蛋白的亚细胞定位分析 | 第27-29页 |
| 3.3.1 间接免疫荧光法检测的特异性试验结果 | 第27-28页 |
| 3.3.2 DPV US10蛋白在DEF细胞中的定位分析 | 第28-29页 |
| 3.4 DPV体外感染DEF后US10基因的转录时相分析 | 第29-33页 |
| 3.4.1 引物特异性检测 | 第29-30页 |
| 3.4.2 标准曲线的绘制 | 第30-31页 |
| 3.4.3 样品检测与结果分析 | 第31-32页 |
| 3.4.5 US10基因类型的鉴定 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-37页 |
| 4.1 DPV US10基因的分子特性分析 | 第33-34页 |
| 4.2 DPV US10基因原核表达及其多克隆抗体制备 | 第34-35页 |
| 4.3 DPV体外感染DEF后US10蛋白的亚细胞定位分析 | 第35页 |
| 4.4 DPV体外感染DEF后US10基因的转录时相分析 | 第35-37页 |
| 第三部分 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第44页 |
