| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1. 序言 | 第10-27页 |
| 1.1 木薯概述 | 第10页 |
| 1.2 植物抗干旱研究进展 | 第10-15页 |
| 1.2.1 植物的抗旱性 | 第10-11页 |
| 1.2.2 植物干旱胁迫下的生理学反应 | 第11页 |
| 1.2.3 植物抗旱的调控途径 | 第11-12页 |
| 1.2.4 植物抗旱相关的功能基因研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3 海藻糖概述 | 第15-18页 |
| 1.3.1 海藻糖的来源 | 第15页 |
| 1.3.2 海藻糖的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.3.3 海藻糖的生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.3.4 海藻糖在生物体内的合成途径简述 | 第17-18页 |
| 1.3.5 海藻糖分解途径简述 | 第18页 |
| 1.4 海藻糖合成酶概述 | 第18-21页 |
| 1.4.1 海藻糖合成酶的基本性质 | 第18-19页 |
| 1.4.2 海藻糖合成酶转基因研究概述 | 第19-21页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR在植物研究中的进展 | 第21-23页 |
| 1.5.1 原理概述 | 第21-22页 |
| 1.5.2 在基因差异表达分析中的应用 | 第22页 |
| 1.5.3 在外源基因拷贝数分析中的应用 | 第22-23页 |
| 1.5.4 在转基因植株鉴定中的应用 | 第23页 |
| 1.6 本生烟研简介 | 第23-25页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 1.8 技术路线 | 第26-27页 |
| 2. 材料、试剂及仪器 | 第27-30页 |
| 2.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.2 菌种与质粒 | 第27页 |
| 2.3 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.4 主要的生化试剂与试剂盒 | 第28页 |
| 2.5 常用培养基 | 第28-30页 |
| 3. 实验方法 | 第30-44页 |
| 3.1 木薯MeTPS1-3基因的扩增 | 第30-32页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第30页 |
| 3.1.2 PCR扩增目的基因 | 第30页 |
| 3.1.3 MeTPS1-3基因与pMD19-T载体的连接转化 | 第30-32页 |
| 3.2 木薯MeTPS1-3基因在不同干旱胁迫时间下各组织中的表达分析 | 第32-36页 |
| 3.2.1 木薯苗的盆栽种植 | 第32页 |
| 3.2.2 PEG6000干旱胁迫处理 | 第32-33页 |
| 3.2.3 SC124和KU50木薯各组织中RNA的提取和纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.4 电泳检测总RNA完整性 | 第34页 |
| 3.2.5 cDNA的合成 | 第34页 |
| 3.2.6 cDNA质量检测 | 第34页 |
| 3.2.7 半定量RT-PCR分析 | 第34-35页 |
| 3.2.8 荧光定量PCR基因差异表达分析 | 第35-36页 |
| 3.3 木薯MeTPS1-3基因植物表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.3.1 MeTPS1-3基因与pEASY-T_1 Simple载体的连接 | 第36页 |
| 3.3.2 MeTPS1-3基因与pCAMBIA2300-35S-OCS植物表达载体连接 | 第36-38页 |
| 3.4 植物表达载体转化农杆菌 | 第38-39页 |
| 3.4.1 制备农杆菌感受态 | 第38-39页 |
| 3.4.2 植物表达载体转化农杆菌菌株GV3103 | 第39页 |
| 3.4.3 阳性克隆筛选与鉴定 | 第39页 |
| 3.5 MeTPS1-3基因遗传转化本生烟 | 第39-40页 |
| 3.5.1 本生烟无菌苗的获得 | 第39页 |
| 3.5.2 农杆菌菌液的准备 | 第39-40页 |
| 3.5.3 侵染及转基因植株的培养 | 第40页 |
| 3.6 转基因本生烟植株的检测 | 第40-42页 |
| 3.6.1 卡那霉素抗性检测 | 第40-41页 |
| 3.6.2 转基因植株PCR检测 | 第41页 |
| 3.6.3 RT-PCR检测外源基因的表达 | 第41页 |
| 3.6.4 荧光定量PCR检测外源基因的表达 | 第41-42页 |
| 3.7 转基因植株的离体叶片失水率检测 | 第42页 |
| 3.8 转基因植株自然干旱处理 | 第42页 |
| 3.9 转基因本生烟不同部位海藻糖检测 | 第42-44页 |
| 3.9.1 本生烟不同部位海藻糖的提取 | 第42-43页 |
| 3.9.2 本生烟海藻糖的测定 | 第43-44页 |
| 4. 结果与分析 | 第44-67页 |
| 4.1 木薯MeTPS1-3基因的克隆和分析 | 第44-46页 |
| 4.2 MeTPS1-3基因氨基酸序列分析 | 第46-47页 |
| 4.3 MeTPS1-3蛋白的聚类分析 | 第47-48页 |
| 4.4 RT-PCR检测干旱胁迫对MeTPS1-3基因表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.5 实时荧光定量PCR检测MeTPS1-3基因干旱胁迫下的表达分析 | 第49-52页 |
| 4.5.1 目的基因和参比基因的特异性扩增检测 | 第50页 |
| 4.5.2 干旱胁迫对木薯MeTPS1-3基因表达的影响 | 第50-52页 |
| 4.6 MeTPS1-3基因的克隆 | 第52页 |
| 4.7 植物表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 4.8 植物表达载体导入农杆菌 | 第55页 |
| 4.9 农杆菌介导法获得转基因本生烟 | 第55-56页 |
| 4.10 转基因本生烟的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 4.11 转基因子代种子抗卡那霉素检测 | 第57-58页 |
| 4.11.1 转基因T1代种子抗性分离比检测 | 第57页 |
| 4.11.2 转基因T2代植株抗性检测 | 第57-58页 |
| 4.12 转基因子代本生烟的PCR鉴定 | 第58页 |
| 4.12.1 转基因T1代PCR鉴定 | 第58页 |
| 4.12.2 转基因T2代PCR检测 | 第58页 |
| 4.13 MeTPS1-3基因在转基因子代本生烟中的表达 | 第58-59页 |
| 4.13.1 MeTPS1-3基因在T1代转基因本生烟的表达 | 第58-59页 |
| 4.13.2 MeTPS1-3基因在T2代转基因烟草中的表达 | 第59页 |
| 4.14 荧光定量PCR检测目的基因在本生烟各器官中的表达 | 第59-60页 |
| 4.15 转基因本生烟海藻糖测定 | 第60-64页 |
| 4.16 转基因本生烟子代离体叶片失水率检测 | 第64-65页 |
| 4.17 转基因本生烟的抗旱性检测 | 第65-67页 |
| 5. 讨论 | 第67-70页 |
| 5.1 关于q-PCR检测MeTPS1-3基因干旱胁迫下的表达 | 第67页 |
| 5.2 关于离体叶片失水速率 | 第67-68页 |
| 5.3 关于木薯海藻糖和海藻糖合成酶基因的后续研究 | 第68-70页 |
| 6. 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
