| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-33页 |
| 1.1 分枝杆菌对几种抗结核药物的抗性机制 | 第13-18页 |
| 1.2 耻垢分枝杆菌抗药调控机制研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2.1 耻垢分枝杆菌是研究分枝杆菌的重要模式生物 | 第18页 |
| 1.2.2 耻垢分枝杆菌的抗药调控机制 | 第18-19页 |
| 1.3 TetR家族转录调控因子 | 第19-28页 |
| 1.3.1 TetR家族转录调控因子参与的生理过程 | 第20-21页 |
| 1.3.2 TetR家族转录调控因子的特征与分布 | 第21-23页 |
| 1.3.3 TetR家族转录调控因子识别DNA的方式 | 第23-27页 |
| 1.3.4 分枝杆菌中的TetR家族转录因子 | 第27-28页 |
| 1.4 双组分系统的发现及调控 | 第28-30页 |
| 1.4.1 分枝杆菌中的双组分系统 | 第29-30页 |
| 1.5 分枝杆菌中运输相关蛋白及其药物抗性机制 | 第30-32页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-53页 |
| 2.1 培养基 | 第33页 |
| 2.2 菌株及质粒 | 第33-35页 |
| 2.3 引物及DNA片段 | 第35页 |
| 2.4 酶和抗生素 | 第35-36页 |
| 2.5 基因克隆 | 第36-37页 |
| 2.5.1 PCR扩增 | 第36页 |
| 2.5.2 氯化钙法制备大肠杆菌的感受态 | 第36页 |
| 2.5.3 转化实验 | 第36-37页 |
| 2.5.4 质粒抽提 | 第37页 |
| 2.6 蛋白质表达和纯化 | 第37-39页 |
| 2.6.1 蛋白质诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.6.2 蛋白质纯化 | 第38-39页 |
| 2.6.3 蛋白质透析 | 第39页 |
| 2.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第39-40页 |
| 2.8 耻垢分枝杆菌基因的敲除 | 第40-46页 |
| 2.8.1 耻垢分枝杆菌的电转化感受态制备 | 第40-41页 |
| 2.8.2 敲除载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.8.3 ms4022和lerR基因敲除 | 第42-43页 |
| 2.8.4 Southern Blot验证 | 第43-46页 |
| 2.9 转录因子的DNA结合活性分析 | 第46-48页 |
| 2.9.1 EMSA实验 | 第46页 |
| 2.9.2 竞争性EMSA实验 | 第46-47页 |
| 2.9.3 DNA足迹实验 | 第47-48页 |
| 2.10 靶基因鉴定和分析 | 第48-51页 |
| 2.10.1 染色质免疫沉淀（ChIP） | 第48-49页 |
| 2.10.2 qRT-PCR实验 | 第49-50页 |
| 2.10.3 β-半乳糖苷酶实验 | 第50-51页 |
| 2.11 耻垢分枝杆菌的药物敏感性分析 | 第51-52页 |
| 2.11.1 耻垢分枝杆菌生长曲线的测定 | 第51页 |
| 2.11.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第51-52页 |
| 2.12 生物信息学分析相关软件 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-93页 |
| 3.1 TetR家族转录因子Ms4022介导耻垢分枝杆菌对利福平的抗性 | 第53-78页 |
| 3.1.1 ms4022影响耻垢分枝杆菌对利福平的抗性 | 第53-57页 |
| 3.1.2 ms4022的克隆、表达及纯化 | 第57-59页 |
| 3.1.3 Ms4022特异性结合自身启动子 | 第59-61页 |
| 3.1.4 Ms4022结合多个位点 | 第61-63页 |
| 3.1.5 Ms4022识别一个 19 bp的保守motif | 第63-66页 |
| 3.1.6 ms4022被成功敲除 | 第66-67页 |
| 3.1.7 Ms4022在体外能够结合潜在靶基因的启动子 | 第67-70页 |
| 3.1.8 ChIP实验证实Ms4022在体内能够结合靶基因的启动子 | 第70-72页 |
| 3.1.9 Ms4022正调控靶基因的表达 | 第72-74页 |
| 3.1.10 运输相关的靶基因表达量增加能增强耻垢分枝杆菌的利福平抗性 | 第74-77页 |
| 3.1.11 运输相关的靶基因对耻垢分枝杆菌的异烟肼和乙胺丁醇抗性影响不大 | 第77-78页 |
| 3.2 双组分系统lerR-lerS介导耻垢分枝杆菌对乙胺丁醇的抗性 | 第78-93页 |
| 3.2.1 LerR影响耻垢分枝杆菌对乙胺丁醇的抗性 | 第78-79页 |
| 3.2.2 耻垢分枝杆菌中lerR的敲除 | 第79-81页 |
| 3.2.3 LerR-LerS的表达纯化 | 第81-84页 |
| 3.2.4 LerR特异性与PDHp和Ms6242p结合 | 第84-87页 |
| 3.2.5 LerR激活靶基因的表达 | 第87-88页 |
| 3.2.6 超表达PDH增强耻垢分枝杆菌对乙胺丁醇的抗性 | 第88-90页 |
| 3.2.7 乙胺丁醇能够激活靶基因的表达 | 第90-91页 |
| 3.2.8 LerR抑制E. coli BL21的生长 | 第91-93页 |
| 4 总结、讨论与展望 | 第93-102页 |
| 4.1 总结 | 第93-94页 |
| 4.2 讨论 | 第94-100页 |
| 4.2.1 Ms4022特异性调控耻垢分枝杆菌对利福平的抗性 | 第94-96页 |
| 4.2.2 Ms4022是一个全局性的转录激活子 | 第96-97页 |
| 4.2.3 lerR-lerS的调控模型分析 | 第97-98页 |
| 4.2.4 LerR识别的motif分析 | 第98-99页 |
| 4.2.5 PDH影响耻垢分枝杆菌对乙胺丁醇的抗性 | 第99-100页 |
| 4.3 展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 论文发表情况 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 附表 | 第114-132页 |
