| 中文摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 缩略词表 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-39页 |
| 1.1 植物花发育相关基因的研究进展 | 第18-23页 |
| 1.1.1 植物花发育的模型 | 第19-20页 |
| 1.1.2 同源异型框B类基因 | 第20-21页 |
| 1.1.3 同源异型框D类基因 | 第21-22页 |
| 1.1.4 二球悬铃木中花器官同源异型基因相关研究 | 第22-23页 |
| 1.2 真核生物启动子研究进展 | 第23-36页 |
| 1.2.1 真核生物启动子组成 | 第23-24页 |
| 1.2.2 启动子的顺式元件 | 第24-25页 |
| 1.2.3 植物启动子的类型 | 第25-30页 |
| 1.2.3.1 组成型启动子 | 第25-26页 |
| 1.2.3.2 诱导型启动子 | 第26-27页 |
| 1.2.3.3 组织特异性启动子 | 第27-30页 |
| 1.2.4 启动子克隆方法 | 第30-32页 |
| 1.2.4.1 启动子探针筛选基因组 | 第30页 |
| 1.2.4.2 启动子捕获 | 第30-31页 |
| 1.2.4.3 反向PCR | 第31页 |
| 1.2.4.4 热不对称交错PCR | 第31-32页 |
| 1.2.5 启动子研究策略 | 第32-36页 |
| 1.2.5.1 生物信息学对启动子进行预测分析 | 第32页 |
| 1.2.5.2 组织化学染色及荧光分析 | 第32页 |
| 1.2.5.3 缺失分析 | 第32-33页 |
| 1.2.5.4 凝胶阻滞试验 | 第33-34页 |
| 1.2.5.5 酵母单杂交技术 | 第34页 |
| 1.2.5.6 染色质免疫共沉淀法 | 第34-35页 |
| 1.2.5.7 定点突变分析 | 第35-36页 |
| 1.3 BARNASE基因研究及应用 | 第36-37页 |
| 1.3.1 BARNASE基因的分离及活性分析 | 第36页 |
| 1.3.2 BARNASE基因的在植物基因工程中的应用 | 第36-37页 |
| 1.4 本课题的研究目的和意义 | 第37-39页 |
| 第二章 二球悬铃木B类基因AP3启动子的克隆及其功能分析 | 第39-58页 |
| 2.1 前言 | 第39页 |
| 2.2 材料与方法 | 第39-47页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第39页 |
| 2.2.2 菌株、载体和感受态细胞 | 第39-40页 |
| 2.2.3 主要试剂与药品 | 第40页 |
| 2.2.4 实验引物 | 第40页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第40-47页 |
| 2.2.5.1 启动子pPaAP3的分离克隆 | 第40-43页 |
| 2.2.5.2 生物信息学对启动子进行预测分析 | 第43-44页 |
| 2.2.5.3 启动子pPaAP3及系列 5’缺失表达载体构建 | 第44-45页 |
| 2.2.5.4 根瘤农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第45页 |
| 2.2.5.5 转基因烟草植株阳性检测 | 第45-46页 |
| 2.2.5.6 GUS蛋白组织化学染色 | 第46页 |
| 2.2.5.7 RNA的抽提 | 第46页 |
| 2.2.5.8 RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 2.3 结果与分析 | 第47-56页 |
| 2.3.1 启动子pPaAP3的克隆及序列分析 | 第47-50页 |
| 2.3.2 启动子pPaAP3不同缺失片段表达的载体构建 | 第50-51页 |
| 2.3.3 转基因烟草的阳性检测 | 第51-52页 |
| 2.3.4 组织化学染色分析启动子各缺失片段的表达模式 | 第52-55页 |
| 2.3.5 RT-PCR检测GUS基因在转基因烟草中的表达模式 | 第55-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 二球悬铃木B类基因PI启动子的克隆及其功能分析 | 第58-70页 |
| 3.1 前言 | 第58页 |
| 3.2 材料与方法 | 第58-60页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第58页 |
| 3.2.2 菌株、载体和感受态细胞 | 第58页 |
| 3.2.3 主要试剂与药品 | 第58-59页 |
| 3.2.4 主要实验方法 | 第59-60页 |
| 3.2.4.1 启动子pPaPI的分离克隆 | 第59页 |
| 3.2.4.2 生物信息学对启动子进行预测分析 | 第59-60页 |
| 3.2.4.3 启动子pPaPI及系列 5’缺失表达载体构建 | 第60页 |
| 3.2.4.4 农杆菌介导的烟草遗传转化和阳性检测 | 第60页 |
| 3.2.4.5 GUS蛋白染色和RNA抽提等方法 | 第60页 |
| 3.3 结果与分析 | 第60-68页 |
| 3.3.1 启动子pPaPI的克隆及序列分析 | 第60-64页 |
| 3.3.2 启动子pPaPI不同缺失片段表达的载体构建 | 第64-65页 |
| 3.3.3 转基因烟草的阳性检测 | 第65-66页 |
| 3.3.4 组织化学染色分析启动子各缺失片段的表达模式 | 第66-68页 |
| 3.3.5 RT-PCR检测GUS基因在转基因烟草中的表达模式 | 第68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 二球悬铃木B类基因PaAP3和PaPI组织特异性启动子在不育植株构建中的应用 | 第70-79页 |
| 4.1 前言 | 第70页 |
| 4.2 材料与方法 | 第70-72页 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 | 第70页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 4.2.2.1 启动子表达载体pPaAP3-p8::BARNASE和pPaPI-p5::BARNASE的构建 | 第70-71页 |
| 4.2.2.2 根瘤农杆菌介导的烟草的遗传转化及阳性转基因植株检测 | 第71-72页 |
| 4.2.2.3 转基因烟草表型植株RT-PCR检测 | 第72页 |
| 4.3 结果与分析 | 第72-77页 |
| 4.3.1 表达载体pPaAP3-p8::BARNASE和pPaPI-p5::BARNASE的构建 | 第72页 |
| 4.3.2 表达载体pPaAP3-p8::BARNASE转基因烟草的表型观测 | 第72-74页 |
| 4.3.3 表达载体pPaPI-p5::BARNASE转基因烟草的表型观测 | 第74-75页 |
| 4.3.4 转基因烟草表型植株RT-PCR检测 | 第75-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-79页 |
| 4.4.1 表达载体pPaAP3-p8::BARNASE、pPaPI-p5::BARNASE转基因烟草的表型比较 | 第77页 |
| 4.4.2 表达载体pPaAP3-p8::BARNASE和pPaPI-p5::BARNASE的功能分析及应用 | 第77-79页 |
| 第五章 二球悬铃木D类基因PaSTK的同源克隆与表达分析 | 第79-88页 |
| 5.1 前言 | 第79页 |
| 5.2 材料与方法 | 第79-82页 |
| 5.2.1 实验材料和试剂 | 第79-80页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第80-82页 |
| 5.2.2.1 PaSTK核心保守片段同源扩增 | 第80页 |
| 5.2.2.2 采用TAIL-PCR结合 3’ RACE克隆PaSTK基因全长 | 第80页 |
| 5.2.2.3 基于二球悬铃木PaSTK基因编码区构建系统树 | 第80-81页 |
| 5.2.2.4 荧光定量检测PaSTK在二球悬铃木各组织中的表达模式 | 第81-82页 |
| 5.3 结果与分析 | 第82-86页 |
| 5.3.1 PaSTK基因核心保守片段扩增及同源比对 | 第82-83页 |
| 5.3.2 PaSTK基因全长结构域分析 | 第83-84页 |
| 5.3.3 基于二球悬铃木PaSTK基因编码区的进化树构建 | 第84-86页 |
| 5.3.4 荧光定量检测PaSTK在二球悬铃木各组织中的表达模式 | 第86页 |
| 5.4 讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 二球悬铃木D类基因PaSTK启动子的克隆、功能分析及其在不育植物构建中的应用 | 第88-99页 |
| 6.1 前言 | 第88页 |
| 6.2 材料与方法 | 第88-91页 |
| 6.2.1 植物材料 | 第88-89页 |
| 6.2.2 菌株、载体和感受态细胞 | 第89页 |
| 6.2.3 主要试剂与药品 | 第89页 |
| 6.2.4 实验方法 | 第89-91页 |
| 6.2.4.1 启动子pPaSTK的分离克隆 | 第89-90页 |
| 6.2.4.2 生物信息学对启动子进行预测分析 | 第90页 |
| 6.2.4.3 启动子表达载体pPaSTK::GUS表达载体的构建 | 第90页 |
| 6.2.4.4 启动子表达载体PaSTK::BARNASE的构建 | 第90页 |
| 6.2.4.5 拟南芥的遗传转化及阳性转基因植株检测 | 第90-91页 |
| 6.2.4.6 考马斯亮蓝法测定pPaSTK::GUS转基因拟南芥GUS蛋白活性 | 第91页 |
| 6.2.4.7 PaSTK::BARNASE转基因拟南芥表型植株RT-PCR检测 | 第91页 |
| 6.3 结果与分析 | 第91-97页 |
| 6.3.1 启动子pPaSTK的克隆及序列分析 | 第91-94页 |
| 6.3.2 启动子表达载体pPaSTK::GUS的构建 | 第94页 |
| 6.3.3 PaSTK::GUS转基因拟南芥的阳性检测 | 第94页 |
| 6.3.4 考马斯亮蓝法测定pPaSTK::GUS转基因拟南芥GUS蛋白活性 | 第94-95页 |
| 6.3.5 表达载体pPaSTK::BARNASE的构建 | 第95-96页 |
| 6.3.6 表达载体pPaSTK::BARNASE转基因拟南芥植株RT-PCR检测 | 第96-97页 |
| 6.3.7 表达载体pPaSTK::BARNASE转基因拟南芥的表型观测 | 第97页 |
| 6.4 讨论 | 第97-99页 |
| 第七章 总结与展望 | 第99-106页 |
| 7.1 总结 | 第99-104页 |
| 7.1.1 启动子的克隆策略 | 第99-100页 |
| 7.1.2 启动子的研究策略 | 第100-101页 |
| 7.1.3 二球悬铃木启动子pPaAP3的特征及应用 | 第101-102页 |
| 7.1.4 二球悬铃木启动子pPaPI的特征及应用 | 第102-103页 |
| 7.1.5 二球悬铃木启动子pPaSTK的特征及应用 | 第103页 |
| 7.1.6 二球悬铃木落果飞毛问题的改良 | 第103-104页 |
| 7.1.7 二球悬铃木遗传转化研究 | 第104页 |
| 7.2 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-121页 |
| 附录A 改良的CTAB法提取基因组DNA | 第121-122页 |
| 附录B 碱裂解法提取质粒DNA（小量法） | 第122-123页 |
| 附录C 大肠杆菌热激感受态的制备及热激法转化 | 第123-124页 |
| 附录D 农杆菌电转感受态的制备及电转化步骤 | 第124-125页 |
| 附录E 农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第125-126页 |
| 附录F 烟草、拟南芥总RNA的提取 | 第126-127页 |
| 附录G mRNA反转录cDNA步骤 | 第127-128页 |
| 附录H 考马斯亮蓝法测定GUS蛋白活性 | 第128-130页 |
| 附录I GENBANK注册基因登录号 | 第130-131页 |
| 附录J PaSTK同源基因列表 | 第131-132页 |
| 博士在读期间已发表文章 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
