| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文中的缩写词 | 第10-15页 |
| 1 前言 | 第15-23页 |
| 1.1 杆状病毒 | 第15-17页 |
| 1.1.1 杆状病毒的结构与分类 | 第15-16页 |
| 1.1.2 杆状病毒的生活周期 | 第16-17页 |
| 1.1.3 杆状病毒的基因表达 | 第17页 |
| 1.2 杆状病毒晚期基因的表达 | 第17-19页 |
| 1.3 β-杆状病毒分子生物学的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 启动子的研究方法 | 第20-21页 |
| 1.4.1 突变分析法 | 第21页 |
| 1.4.2 瞬时表达分析 | 第21页 |
| 1.4.3 稳定表达分析 | 第21页 |
| 1.5 研究目的及其意义 | 第21-23页 |
| 2 实验材料和设备 | 第23-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 昆虫细胞系和病毒株 | 第23页 |
| 2.1.2 大肠杆菌菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 常用质粒 | 第23页 |
| 2.1.4 细菌培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第24页 |
| 2.1.6 常用溶液 | 第24-25页 |
| 2.1.7 酶、药品及其相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.8 所用载体 | 第26页 |
| 2.1.9 实验中使用的引物 | 第26-28页 |
| 2.1.10 实验中构建的重组质粒与重组病毒 | 第28-30页 |
| 2.2 仪器设备 | 第30-32页 |
| 3 实验方法 | 第32-43页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第32-36页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第32页 |
| 3.1.2 目的片段扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.3 DNA片段纯化回收 | 第33页 |
| 3.1.4 酶切载体与目的片段 | 第33-34页 |
| 3.1.5 乙醇沉淀回收目的片段 | 第34页 |
| 3.1.6 片段和载体的连接 | 第34页 |
| 3.1.7 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第34-35页 |
| 3.1.8 转化 | 第35页 |
| 3.1.9 质粒的小量制备 | 第35-36页 |
| 3.1.10 重组质粒的鉴定与菌种保存 | 第36页 |
| 3.2 重组Bacmid的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.1 大肠杆菌DH10bac感受态的制备 | 第36页 |
| 3.2.2 转座 | 第36-37页 |
| 3.2.3 重组Bacmid的小量制备 | 第37页 |
| 3.2.4 重组Bacmid的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 敲除型Bacmid的构建 | 第38-40页 |
| 3.3.1 电转化感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 3.3.2 基因敲除 | 第39页 |
| 3.3.3 敲除型Bacmid的验证 | 第39-40页 |
| 3.4 细胞的转染 | 第40页 |
| 3.5 细胞的感染 | 第40-41页 |
| 3.6 荧光素酶活性检测 | 第41页 |
| 3.7 瞬时表达实验 | 第41-42页 |
| 3.7.1 相应质粒与Bacmid的制备 | 第41页 |
| 3.7.2 细胞的共转染 | 第41-42页 |
| 3.7.3 荧光素酶活性检测 | 第42页 |
| 3.8 细胞中基因组的提取 | 第42-43页 |
| 4 实验结果 | 第43-61页 |
| 4.1 PlxyGV晚期启动子表达活性的瞬时实验分析 | 第43-46页 |
| 4.1.1 10个PlxyGV晚期启动子序列分析 | 第43-44页 |
| 4.1.2 PlxyGV报告质粒的构建 | 第44页 |
| 4.1.3 瞬时表达分析 | 第44-46页 |
| 4.2 PlxyGV与AcMNPV晚期启动子在AcMNPV bacmid转染的Sf9细胞中的表达活性的对比 | 第46-49页 |
| 4.2.1 AcMNPV晚期报告质粒构建 | 第46-48页 |
| 4.2.2 瞬时表达分析 | 第48-49页 |
| 4.3 插入AcMNPV基因组的PlxyGV晚期基因启动子在被感染细胞中的表达活性 | 第49-55页 |
| 4.3.1 PlxyGV和AcMNPV晚期基因报告病毒的构建 | 第49-51页 |
| 4.3.2 PlxyGV和AcMNPV晚期启动子在被重组病毒感染的Sf9细胞中的表达活性分析 | 第51-55页 |
| 4.4 AcMNPV突变体在共转染Sf细胞中对PlxyGV DNA复制和晚期基因表达的拯救作用 | 第55-61页 |
| 4.4.1 PlxyGV晚期基因报告bacmids和AcMNPV vp39基因缺失突变体构建 | 第55-56页 |
| 4.4.2 AcMNPV不同突变体在共转染细胞中对PlxyGV晚期基因表达的影响 | 第56-58页 |
| 4.4.3 AcMNPV bacmid不同突变体对PlxyGV DNA复制的影响 | 第58-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
