| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-30页 |
| 1.1 程序性细胞死亡 | 第13-17页 |
| 1.1.1 概述 | 第13-16页 |
| 1.1.2 线虫程序性细胞死亡的研究 | 第16-17页 |
| 1.2 XKR蛋白家族 | 第17-19页 |
| 1.2.1 线虫ced-8基因及其人同源物xkr基因 | 第17-18页 |
| 1.2.2 XKR蛋白家族与细胞凋亡 | 第18-19页 |
| 1.3 microRNA概述 | 第19-29页 |
| 1.3.1 RNA与非编码RNA | 第19-21页 |
| 1.3.2 microRNA的发现及研究 | 第21-22页 |
| 1.3.3 microRNA生物起源与加工 | 第22-23页 |
| 1.3.4 miRNA的作用方式及分类 | 第23-24页 |
| 1.3.5 miRNA与siRNA的异同 | 第24-28页 |
| 1.3.6 microRNA与细胞凋亡 | 第28-29页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-37页 |
| 2.1.1 仪器及设备 | 第30-31页 |
| 2.1.2 生化试剂及试剂盒 | 第31-34页 |
| 2.1.3 在线预测工具 | 第34页 |
| 2.1.4 细胞株与菌株 | 第34-35页 |
| 2.1.5 引物序列及其他寡核苷酸序列 | 第35-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-53页 |
| 2.2.1 细胞的培养 | 第37-38页 |
| 2.2.2 细胞凋亡诱导模型的建立 | 第38页 |
| 2.2.3 细胞总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.4 RNA的反转录 | 第39-40页 |
| 2.2.5 半定量RT-PCR | 第40-41页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR | 第41-42页 |
| 2.2.7 细胞基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.8 目的片断的PCR扩增 | 第43页 |
| 2.2.9 PCR产物与载体的酶切 | 第43-45页 |
| 2.2.10 PCR产物与载体的胶回收 | 第45-46页 |
| 2.2.11 目的片段与载体的连接 | 第46页 |
| 2.2.12 感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第46-47页 |
| 2.2.13 连接产物的转化 | 第47页 |
| 2.2.14 阳性重组子的鉴定及测序 | 第47页 |
| 2.2.15 去内毒素质粒的提取 | 第47-48页 |
| 2.2.16 定点突变载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.2.17 细胞转染 | 第49页 |
| 2.2.18 双荧光素酶报告基因检测 | 第49-50页 |
| 2.2.19 稳定转染细胞株的建立 | 第50-51页 |
| 2.2.20 Western Blot免疫印迹杂交 | 第51-53页 |
| 第三章 结果与分析 | 第53-89页 |
| 3.1 xkr1在细胞凋亡中的动力学变化 | 第53-55页 |
| 3.2 计算预测 | 第55-57页 |
| 3.3 载体构建 | 第57-61页 |
| 3.3.1 获得的目的基因 | 第57-59页 |
| 3.3.2 重组载体的酶切鉴定 | 第59-61页 |
| 3.4 调控xkr家族基因microRNA的初步筛选 | 第61-64页 |
| 3.4.1 调控xkr1基因microRNA的初步筛选 | 第61-62页 |
| 3.4.2 调控xkr6基因microRNA的初步筛选 | 第62-64页 |
| 3.4.3 调控xkr8基因microRNA的初步筛选 | 第64页 |
| 3.5 细胞外源xkr家族基因与microRNA的相互作用 | 第64-75页 |
| 3.5.1 构建的定点突变载体 | 第65页 |
| 3.5.2 细胞外源xkr1基因与microRNA的相互作用 | 第65-67页 |
| 3.5.3 细胞外源xkr4基因与miR-29b的相互作用 | 第67-68页 |
| 3.5.4 细胞外源xkr6基因与microRNA的相互作用 | 第68-72页 |
| 3.5.5 细胞外源xkr7基因与miR-29b的相互作用 | 第72页 |
| 3.5.6 细胞外源xkr8基因与microRNA的相互作用 | 第72-73页 |
| 3.5.7 斑马鱼细胞外源xkr基因与dre-miR-29b的相互作用 | 第73-75页 |
| 3.6 细胞内源xkr家族基因与microRNA的相互作用 | 第75-86页 |
| 3.6.1 293T细胞稳转株的建立 | 第75-76页 |
| 3.6.2 细胞内源xkr1基因与microRNA的相互作用 | 第76-78页 |
| 3.6.3 细胞内源xkr6基因与microRNA的相互作用 | 第78-84页 |
| 3.6.4 细胞内源xkr8基因与microRNA的相互作用 | 第84-86页 |
| 3.7 结论 | 第86-89页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第89-96页 |
| 4.1 双荧光素酶报告基因检测系统在本研究中的应用 | 第89-90页 |
| 4.2 促进/抑制凋亡microRNA的分类 | 第90-92页 |
| 4.3 miRNA-xkr互作的保守性分析 | 第92-94页 |
| 4.4 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
