| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.1 微线体蛋白的黏附结构域 | 第15-17页 |
| 1.2 弓形虫微线体蛋白 | 第17-19页 |
| 1.3 柔嫩艾美耳球虫的微线体蛋白 | 第19-21页 |
| 1.4 疟原虫的微线体蛋白 | 第21-22页 |
| 1.5 顶复器门原虫顶体膜抗原 | 第22-23页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫CHP559和CHP39基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-42页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验虫株 | 第24页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.5 试剂配制方法 | 第25页 |
| 2.2.6 柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体的收集与纯化 | 第25-27页 |
| 2.2.7 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.8 柔嫩艾美耳球虫子孢子RACE模板的制备 | 第27-29页 |
| 2.2.9 cDNA 5’末端序列的扩增 | 第29-31页 |
| 2.2.10柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白基因的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.2.11柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA的合成 | 第32页 |
| 2.2.12目的基因开放阅读框的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.13两个保守蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的转录水平分析 | 第33-35页 |
| 2.3 结果 | 第35-40页 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体的收集与纯化 | 第35页 |
| 2.3.2 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.3 柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.4 柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白基因的生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 2.3.5 柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白基因在不同发育阶段的转录水平分析 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫两个保守蛋白的原核表达及功能初步研究 | 第42-63页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-50页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第42页 |
| 3.2.2 实验虫株、载体及细胞 | 第42页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第43页 |
| 3.2.5 主要实验试剂的配制 | 第43-44页 |
| 3.2.6 重组表达质粒pGEX-4T2EtCHP559和pET28a-EtCHP39的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.7 重组表达质粒pGEX-4T2EtCHP559和pET28a-EtCHP39的的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.8 重组表达质粒pCold-TF-EtCHP559的构建、鉴定与表达 | 第46页 |
| 3.2.9 pCold-TF-EtCHP559和pET28a-EtCHP39表达重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.10 EtCHP559和EtCHP39重组蛋白多克隆抗体的制备与纯化 | 第47页 |
| 3.2.11 EtCHP559和EtCHP39重组蛋白免疫原性和反应原性分析 | 第47-48页 |
| 3.2.12 DF-1 细胞的复苏与培养 | 第48页 |
| 3.2.13 EtCHP559和EtCHP39在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的分布与定位分析 | 第48-49页 |
| 3.2.14 EtCHP559和EtCHP39重组蛋白多克隆抗体对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的体外抑制分析 | 第49-50页 |
| 3.3 结果 | 第50-61页 |
| 3.3.1 原核重组表达质粒的构建 | 第50-52页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达 | 第52-55页 |
| 3.3.3 重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.4 重组蛋白多克隆抗体的纯化 | 第56页 |
| 3.3.5 EtCHP559和EtCHP39重组蛋白免疫原性和反应原性分析 | 第56-58页 |
| 3.3.6 天然蛋白的间接免疫荧光定位 | 第58页 |
| 3.3.7 体外抑制实验 | 第58-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫CHP559和CHP39蛋白与AMA1蛋白互作关系的验证 | 第63-78页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 材料与方法 | 第63-67页 |
| 4.2.1 主要实验试剂 | 第63页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第63-64页 |
| 4.2.3 EtCHP559、EtCHP39和EtAMA1在柔嫩艾美耳球虫子孢子的间接免疫荧光共定位分析 | 第64页 |
| 4.2.4 EtCHP559、EtCHP39和EtAMA1基因的克隆 | 第64-65页 |
| 4.2.5 重组真核表达质粒的构建 | 第65页 |
| 4.2.6 重组质粒转染DF-1 细胞 | 第65-66页 |
| 4.2.7 Western blot鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第66页 |
| 4.2.8 间接免疫荧光鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第66页 |
| 4.2.9 免疫共沉淀 | 第66-67页 |
| 4.2.10双分子荧光互补实验（BiFC） | 第67页 |
| 4.3 结果 | 第67-76页 |
| 4.3.1 天然蛋白的间接免疫荧光共定位分析 | 第67-68页 |
| 4.3.2 真核重组表达质粒的构建 | 第68-70页 |
| 4.3.3 Western blot分析真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第70-72页 |
| 4.3.4 间接免疫荧光鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第72-74页 |
| 4.3.5 免疫共沉淀结果 | 第74页 |
| 4.3.6 BiFC检测蛋白间的相互作用 | 第74-76页 |
| 4.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第五章 全文结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
