| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-43页 |
| 1 重要海水养殖鱼类概述 | 第15-18页 |
| ·重要海水经济鱼类养殖现状 | 第15-16页 |
| ·重要海水经济鱼类养殖业存在的主要问题 | 第16-18页 |
| 2 鱼类细胞系的建系意义及其理论与应用价值 | 第18-36页 |
| ·鱼类细胞系在环境污染物检测上的应用 | 第18-25页 |
| ·我国海洋环境污染现状 | 第18-19页 |
| ·有机磷农药污染 | 第19-20页 |
| ·有机磷农药污染对鱼类的毒性效应 | 第20-21页 |
| ·环境污染物的常用检测方法 | 第21-23页 |
| ·鱼类细胞系在环境污染物检测中的应用 | 第23-25页 |
| 2、2 鱼类细胞系在鱼类免疫学研究中的应用 | 第25-31页 |
| ·天然免疫与Toll-like-receptor(TLRs)概述 | 第25-31页 |
| ·鱼类TLRs研究进展 | 第31页 |
| ·Toll 样受体2(Toll-likc receptor2,TLR2)概述 | 第31页 |
| ·鱼类细胞系在转基因技术研究中的应用 | 第31-35页 |
| ·转基因技术及转基因鱼研究现状 | 第31-32页 |
| ·水产动物转基因方法 | 第32-33页 |
| ·脂质体转染法介导的基因转染及影响因素 | 第33页 |
| ·海水鱼类细胞系在转基因研究中的应用 | 第33-35页 |
| ·鱼类细胞系在其它方面研究中的应用 | 第35-36页 |
| 3 鱼类细胞培养与细胞系建立的研究进展 | 第36-41页 |
| ·鱼类细胞培养的基本方法 | 第36-38页 |
| ·鱼类原代培养的组织来源及培养方法 | 第36-37页 |
| ·影响鱼类原代细胞体外生长的条件 | 第37页 |
| ·鱼类细胞传代培养与建系方法 | 第37-38页 |
| ·目前国内外已建立的鱼类细胞系 | 第38-41页 |
| 4 本论文的研究目的和研究意义 | 第41-43页 |
| 第二章 大黄鱼三种组织细胞系的建立及其鉴定 | 第43-61页 |
| 1 材料和方法 | 第44-49页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验试剂及溶液配制方法 | 第44-45页 |
| ·主要实验仪器 | 第45-46页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞原代培养的启动 | 第46页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞最适培养基的确定 | 第46-47页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞最适培养温度的确定 | 第47页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞的传代培养 | 第47页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏细胞系细胞的冻存与复苏 | 第47-48页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏细胞系细胞的生长曲线测定 | 第48页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏细胞系细胞的染色体分析 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-56页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞的最适培养基 | 第49页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞最适培养温度 | 第49-50页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏组织细胞的原代培养、传代培养及其细胞 系的建立 | 第50-52页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏细胞系细胞的生长特性 | 第52-53页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏细胞系细胞的冻存与复苏 | 第53页 |
| ·大黄鱼鳍、吻端和脾脏细胞系细胞的染色体分析 | 第53-56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| ·大黄鱼三种细胞系细胞的原代培养启动 | 第56页 |
| ·大黄鱼三种细胞系细胞的最适体外培养体系 | 第56-58页 |
| ·大黄鱼三种细胞系细胞的传代方法及其生长特性 | 第58页 |
| ·大黄鱼三种细胞系细胞的染色体分析 | 第58-59页 |
| 4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第三章 大黄鱼鳍细胞系在有机磷农药毒性研究及其环境污染检测中的应用 | 第61-79页 |
| 1 材料与方法 | 第62-67页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验试剂及溶液配制方法 | 第62-63页 |
| ·主要实验仪器 | 第63-64页 |
| ·不同浓度久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞的处理 | 第64页 |
| ·MTT法检测久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞的毒性作用 | 第64页 |
| ·细胞总蛋白含量法检测久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞的毒性作用 | 第64-65页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞乙酞胆碱醋酶(ACh)E活性的影响 | 第65页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞超氧化物歧化酶活性的影响 | 第65-66页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞谷肤甘肤-S-转移酶(GTS)活性的 影响 | 第66-67页 |
| ·统计分析 | 第67页 |
| 2 结果 | 第67-72页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞的48h半数抑制浓度 | 第67-68页 |
| ·久效磷处理的大黄鱼鳍细胞系细胞在光镜下的形态变化 | 第68-69页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞AChE活性的影响 | 第69-70页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞500活性的影响 | 第70-71页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞GST活性的影响 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-77页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞的毒性效应 | 第72-73页 |
| ·久效磷对大黄鱼鳍细胞系细胞几种酶活性的影响及其致毒机理 的初步探讨 | 第73-76页 |
| ·应用大黄鱼鳍细胞系检测水环境中有机磷农药污染的可行性 | 第76-77页 |
| 4 本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 Toll样受体2基因在大黄鱼吻端细胞系中的 表达及其免疫功能研究 | 第79-97页 |
| 1 实验材料和方法 | 第80-90页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·实验试剂及溶液配制方法 | 第80-81页 |
| ·实验仪器 | 第81-82页 |
| ·大黄鱼吻端细胞系细胞总RNA的提取 | 第82-83页 |
| ·TLR2 cDNA第一条链的合成 | 第83-84页 |
| ·TLR2 cDNA保守序列的PCR扩增 | 第84页 |
| ·TLR2凝胶电泳DNA片段的回收 | 第84-85页 |
| ·DNA片段与克隆载体pMD18-T的连接 | 第85页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第85-86页 |
| ·质粒向大肠杆菌转化(热激法) | 第86页 |
| ·PCR快速鉴定阳性克隆 | 第86-87页 |
| ·核酸序列测定及分析 | 第87页 |
| ·3’RACE扩增TLR2 3’末端序列 | 第87-89页 |
| ·实时定量PCR分析TLR2 mRNA表达量变化 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-94页 |
| ·大黄鱼吻端细胞系细胞总RNA的提取与鉴定 | 第90-91页 |
| ·大黄鱼TLR2保守区cDNA的克隆 | 第91-92页 |
| ·3’RACE扩增TLR2 3’末端序列 | 第92-93页 |
| ·实时定量PCR分析TLR2 mRNA表达量变化 | 第93-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| ·大黄鱼吻端细胞系细胞总RNA的提取与鉴定 | 第94-95页 |
| ·大黄鱼TLR2 cDNA片段扩增 | 第95页 |
| ·实时定量PCR分析TLR2 mRNA表达量变化 | 第95-96页 |
| 4 本章小结 | 第96-97页 |
| 第五章 大黄鱼脾脏细胞系转基因技术的初步研究 | 第97-108页 |
| 1 材料和方法 | 第98-102页 |
| ·实验材料 | 第98页 |
| ·实验试剂及溶液配制方法 | 第98页 |
| ·主要实验仪器 | 第98-99页 |
| ·G418的最佳筛选浓度 | 第99页 |
| ·pcDNA3.1-GFP质粒的提取 | 第99-100页 |
| ·脂质体Lipofectamine2000~(TM)介导大黄鱼脾脏细胞系细胞转染 | 第100-101页 |
| ·最适细胞融合度的确定 | 第101页 |
| ·最适DNA与脂质体比例的确定 | 第101页 |
| ·数据处理 | 第101-102页 |
| 2 结果 | 第102-105页 |
| ·G418的最佳筛选浓度 | 第102-103页 |
| ·质粒提取 | 第103页 |
| ·GFP报告基因在大黄鱼脾脏细胞系细胞中的表达 | 第103-104页 |
| ·最适细胞接种密度的确定 | 第104-105页 |
| ·最适DNA与脂质体比例的确定 | 第105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 4 本章小结 | 第107-108页 |
| 全文总结 | 第108-111页 |
| 参考文献 | 第111-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 发表论文及专利 | 第122页 |
