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海洋拮抗菌JG1的分离鉴定、应用及热激蛋白DnaK的保护机制初探

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
1 文献综述第13-38页
   ·海水养殖的现状第13-20页
     ·国内外海水养殖的发展状况第13-15页
     ·水产养殖病害的现状、原因及对策第15-20页
   ·有益菌的研究现状第20-25页
     ·有益菌的定义第20-21页
     ·有益菌作用的方式第21-23页
     ·有益菌的筛选第23页
     ·有益菌在调节鱼类肠道菌群中的应用第23-25页
   ·免疫刺激剂的研究及其应用第25-28页
     ·免疫刺激剂的概念第25-26页
     ·用于水产养殖的主要免疫刺激剂第26页
     ·热激蛋白(Heat shock protein)第26-28页
     ·免疫刺激剂目前存在的问题和发展前景第28页
   ·无菌动物的研究和应用第28-31页
     ·无菌动物研究产生的背景第28-29页
     ·应用于水产养殖的无菌动物第29-30页
     ·卤虫(Artemia,brine shrimp)第30-31页
   ·海洋细菌分类鉴定的一般步骤第31-35页
   ·本论文的研究目的和意义第35-38页
2 大菱鲜养殖环境微生物区系的初步研究第38-50页
   ·引言第38-39页
   ·材料和方法第39-43页
     ·采样地点和研究对象第39页
     ·主要仪器、试剂和培养基第39-40页
     ·鱼类样品中总异养菌数和总弧菌数的检测第40页
     ·水体的水质因子和样品中总异养菌数和总弧菌数的检测第40-41页
     ·水体中总细菌数(AODC)和总活菌数(DVC)的检测第41页
     ·菌株的分离、纯化和保种第41-42页
     ·革兰氏染色和拮抗菌的筛选第42页
     ·应用PCR-RFLP技术分析微生物群落的多样性第42-43页
   ·结果第43-48页
     ·发病大菱鲆的症状第43页
     ·水质因子第43-44页
     ·大菱鲆肠道、水体中的总菌数、总活菌数、总异养菌数、总弧菌数第44-46页
     ·分离菌株的基因组DNA的提取第46页
     ·16 S rDNA序列扩增第46-47页
     ·RFLP分析第47页
     ·革兰氏染色和拮抗菌的筛选第47页
     ·各批次样品分离的菌株数和编号统计第47-48页
   ·讨论第48-49页
   ·小结第49-50页
3 海洋拮抗菌GJ1的分类鉴定及抑菌谱测定第50-63页
   ·引言第50-51页
   ·材料和方法第51-55页
     ·主要仪器,试剂和培养基第51-52页
     ·实验菌株的准备第52页
     ·JG1的基因组DNA的提取第52页
     ·JG1的16S rDNA扩增第52页
     ·16S rDNA序列PCR产物纯化第52-53页
     ·16S rDNA序列与TA载体的连接第53-55页
   ·结果第55-60页
     ·JG1的16S rDNA序列及比对结果第55页
     ·JG1系统进化树的构建第55-56页
     ·JG1的表型特征第56-58页
     ·JG1抑菌效果的测定第58-60页
   ·讨论第60-61页
   ·小结第61-63页
4 海洋拮抗菌J61快速检测技术的建立及其在水产动物中的 应用研究第63-77页
   ·引言第63-64页
   ·材料和方法第64-70页
     ·实验仪器和试剂第64页
     ·实验菌株的准备第64-65页
     ·实验动物的准备第65页
     ·JG1的动物致病性实验第65页
     ·基于gyrB基因的JG1的种特异性引物的设计和灵敏度测试第65-67页
     ·无菌卤虫系统的制备第67-68页
     ·JG1在液体培养基中与VC的对抗情况第68-69页
     ·JG1在卤虫对抗VC中的作用第69-70页
   ·结果第70-74页
     ·JG1对动物的致病性实验第70-71页
     ·JG1的gyrB基因第71页
     ·JG1的gyrB种特异性引物的特异性第71页
     ·JG1的种特异性引物PCR扩增的灵敏度第71-72页
     ·液体培养环境下JG1与VC的对抗第72-73页
     ·无菌环境下JG1在卤虫对抗VC中的作用第73页
     ·JG1在卤虫体内的定植情况第73-74页
   ·讨论第74-76页
   ·小结第76-77页
5 无菌和开放环境下产DnaK大肠杆菌对卤虫抵抗坎贝氏弧菌感染的作用研究第77-96页
   ·引言第77-78页
   ·材料和方法第78-85页
     ·实验菌株的准备第78页
     ·诱导表达DnaK的大肠杆菌的制备第78页
     ·无菌卤虫系统的制备第78-79页
     ·实验日常管理及投喂策略第79页
     ·YS2对卤虫营养贡献力的研究第79页
     ·无菌环境下YS2对卤虫对抗坎贝氏弧菌VC的影响第79页
     ·开放环境下YS2对卤虫对抗坎贝氏弧菌VC的影响第79-80页
     ·开放环境下大体积饲养卤虫的最适密度和最佳投喂方式第80页
     ·大体积开放环境下YS2对卤虫对抗坎贝氏弧菌VC的影响第80-81页
     ·开放环境下YS2对卤虫体内微生物区系的影响研究第81-85页
     ·统计分析第85页
   ·结果第85-91页
     ·YS2对卤虫营养贡献力的研究第85页
     ·无菌环境下YS2对卤虫对抗坎贝氏弧菌VC的影响第85-86页
     ·开放环境下YS2对卤虫对抗坎贝氏弧菌VC的影响第86页
     ·开放环境下大体积饲养卤虫的最适密度和最佳投喂方式第86-87页
     ·大体积开放环境下YS2对卤虫对抗坎贝氏弧菌VC的影响第87-88页
     ·巢氏PCR扩增细菌16S rDNA V3区第88-89页
     ·变性梯度凝胶电泳(DGGE)第89-91页
   ·讨论第91-94页
   ·小结第94-96页
6 全文总结第96-98页
   ·主要研究结论第96页
   ·主要创新点第96-98页
参考文献第98-119页
附录第119-125页
致谢第125页

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