| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩略语 | 第13-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-26页 |
| 1.1 微小RNA | 第16-17页 |
| 1.2 微小RNA与肿瘤 | 第17-19页 |
| 1.3 微小RNA与表观遗传学调控 | 第19-20页 |
| 1.4 DNA甲基化与髓系肿瘤 | 第20-26页 |
| 1.4.1 AML | 第22-23页 |
| 1.4.2 CML | 第23-24页 |
| 1.4.3 MDS | 第24-26页 |
| 第二章 本论文研究的目的、方法及实验方案的设计、意义 | 第26-30页 |
| 2.1 研究背景及目的 | 第26页 |
| 2.2 研究方法及技术 | 第26-28页 |
| 2.2.1 实时荧光定量PCR（RQ-PCR） | 第26-27页 |
| 2.2.2 实时定量甲基化特异性PCR（RQ-MSP） | 第27-28页 |
| 2.2.3 亚硫酸氢盐测序（Bisulfite sequencing PCR, BSP） | 第28页 |
| 2.3 实验方案的设计 | 第28-29页 |
| 2.4 本研究的意义 | 第29-30页 |
| 第三章 AML患者中miR-378基因 5’侧翼区甲基化研究 | 第30-54页 |
| 3.1 材料 | 第30-32页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第30页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.4 引物 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-41页 |
| 3.2.1 细胞培养和药物处理 | 第32页 |
| 3.2.2 骨髓单个核细胞的分离、全部mRNA及基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.3 DNA硫化修饰（Epitect? Bisulfite Kit修饰DNA） | 第33-34页 |
| 3.2.4 逆转录 | 第34页 |
| 3.2.5 MiR-378基因表达的RQ-PCR检测 | 第34-35页 |
| 3.2.6 MiR-378基因 5’侧翼区的RQ-MSP检测 | 第35-37页 |
| 3.2.7 MiR-378基因 5’侧翼区BSP分析 | 第37页 |
| 3.2.8 纯化回收PCR产物 | 第37-38页 |
| 3.2.9 构建重组载体 | 第38页 |
| 3.2.10 重组质粒转化 | 第38-39页 |
| 3.2.11 重组质粒提取及测序、鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.12 建立阳性模板 | 第40页 |
| 3.2.13 细胞遗传学检测 | 第40-41页 |
| 3.2.14 基因突变检测 | 第41页 |
| 3.2.15 统计学处理 | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-51页 |
| 3.3.1 RQ-MSP灵敏度、重复性、特异性 | 第41-43页 |
| 3.3.2 MiR-378基因 5’侧翼区CpG岛 | 第43-44页 |
| 3.3.3 对照组miR-378基因 5’侧翼区甲基化水平 | 第44-45页 |
| 3.3.4 AML患者miR-378基因 5’侧翼区甲基化水平与临床相关性 | 第45-47页 |
| 3.3.5 MiR-378基因甲基化态势与AML患者染色体核型分析 | 第47-48页 |
| 3.3.6 AML患者miR-378基因 5’侧翼区甲基化密度分析 | 第48-49页 |
| 3.3.7 MiR-378基因 5’侧翼区甲基化与表达相关性分析 | 第49-51页 |
| 3.3.8 MiR-378基因 5’侧翼区甲基化态势与AML患者预后分析 | 第51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-54页 |
| 第四章 CML患者中miR-378基因 5’侧翼区甲基化研究 | 第54-60页 |
| 4.1 材料 | 第54页 |
| 4.1.1 研究对象 | 第54页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第54页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.4 引物 | 第54页 |
| 4.2 方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 骨髓单个核细胞分离及基因组DNA制备 | 第54-55页 |
| 4.2.2 DNA硫化修饰 | 第55页 |
| 4.2.3 MiR-378基因 5’侧翼区RQ-MSP检测 | 第55页 |
| 4.2.4 纯化回收PCR产物 | 第55页 |
| 4.2.5 构建重组载体 | 第55页 |
| 4.2.6 重组质粒转化 | 第55页 |
| 4.2.7 重组质拉提取及测序、鉴定 | 第55页 |
| 4.2.8 建立阳性模板 | 第55页 |
| 4.2.9 细胞遗传学检查 | 第55页 |
| 4.2.10统计学处理 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-58页 |
| 4.3.1 CML患者和对照组miR-378基因 5’侧翼区甲基化水平 | 第55-57页 |
| 4.3.2 MiR-378基因 5’侧翼区甲基化水平与临床相关性 | 第57页 |
| 4.3.3 不同分期CML患者miR-378基因 5’侧翼区甲基化水平 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 MDS患者中MiR-378基因 5’侧翼区甲基化研究 | 第60-70页 |
| 5.1 材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 研究对象 | 第60页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第60页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第60-61页 |
| 5.1.4 引物 | 第61页 |
| 5.2 方法 | 第61-62页 |
| 5.2.0 BMMNCs 分离及基因组 DNA 制备 | 第61页 |
| 5.2.1 DNA 硫化修饰 | 第61页 |
| 5.2.2 mi R-378 基因 5’侧翼区 RQ-MSP 检测 | 第61页 |
| 5.2.3 miR-378基因5’侧翼区 BSP 分析 | 第61页 |
| 5.2.4 PCR 扩增产物纯化回收 | 第61页 |
| 5.2.5 重组载体构建 | 第61页 |
| 5.2.6 重组质粒转化 | 第61页 |
| 5.2.7 重组质拉提取及测序、鉴定 | 第61页 |
| 5.2.8 建立阳性模板 | 第61页 |
| 5.2.9 细胞遗传学检查 | 第61页 |
| 5.2.10 基因突变检测 | 第61-62页 |
| 5.2.11 统计学处理 | 第62页 |
| 5.3 结果 | 第62-68页 |
| 5.3.1 MDS患者和对照组miR-378基因 5’侧翼区甲基化水平 | 第62-63页 |
| 5.3.2 MiR-378基因 5’侧翼区甲基化水平与临床相关性 | 第63-65页 |
| 5.3.3 MDS患者miR-378基因 5’侧翼区甲基化密度分析 | 第65页 |
| 5.3.4 MiR-378基因 5’侧翼区甲基化态势与MDS患者预后分析 | 第65-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 结论和展望 | 第70-71页 |
| 6.1 主要结论 | 第70页 |
| 6.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第84页 |
