| 摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 第一部分 食管鳞癌预后相关的DNA甲基化分子标志物的筛选及验证 | 第18-73页 |
| 1 材料与方法 | 第18-26页 |
| 1.1 研究对象 | 第18-20页 |
| 1.1.1 研究对象纳入、排除标准 | 第18页 |
| 1.1.2 实验样本 | 第18-19页 |
| 1.1.3 资料收集 | 第19页 |
| 1.1.4 TCGA样本集、数据集下载及介绍 | 第19-20页 |
| 1.2 实验材料 | 第20-21页 |
| 1.2.1 主要仪器和耗材 | 第20页 |
| 1.2.2 主要实验试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 实验方法 | 第21-26页 |
| 1.3.1 预后相关的甲基化位点筛选 | 第21-22页 |
| 1.3.2 组织DNA提取 | 第22页 |
| 1.3.3 测量DNA浓度 | 第22页 |
| 1.3.4 甲基化阳性参照的制备 | 第22-23页 |
| 1.3.5 DNA样品亚硫酸氢盐处理 | 第23页 |
| 1.3.6 引物设计与合成 | 第23-25页 |
| 1.3.7 荧光定量甲基化特异性PCR技术 | 第25页 |
| 1.3.8 检测扩增产物片段 | 第25-26页 |
| 1.4 统计分析 | 第26页 |
| 2 实验结果 | 第26-64页 |
| 2.1 预后相关的DNA甲基化位点筛选 | 第26-33页 |
| 2.1.1 TCGA食管鳞癌随访队列基本信息 | 第26-28页 |
| 2.1.2 筛选流程和结果 | 第28-33页 |
| 2.2 样本验证 | 第33-64页 |
| 2.2.1 引物测试 | 第33-36页 |
| 2.2.2 候选基因甲基化水平 | 第36-38页 |
| 2.2.3 基因甲基化与临床病理的关系 | 第38-49页 |
| 2.2.4 总体生存情况与预后分析 | 第49-64页 |
| 3 讨论 | 第64-72页 |
| 4 小结 | 第72-73页 |
| 第二部分 FAM178B基因在食管鳞癌细胞中的功能研究 | 第73-95页 |
| 1 材料与方法 | 第73-83页 |
| 1.1 实验材料 | 第73-75页 |
| 1.1.1 细胞系、工具载体和菌株 | 第73页 |
| 1.1.2 主要仪器和耗材 | 第73-74页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第74-75页 |
| 1.2 实验方法 | 第75-83页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第75-76页 |
| 1.2.2 细胞RNA提取 | 第76页 |
| 1.2.3 反转录获得cDNA | 第76-77页 |
| 1.2.4 Real-time PCR检测 | 第77页 |
| 1.2.5 去甲基化实验 | 第77-78页 |
| 1.2.6 FAM178B基因过表达慢病毒克隆的制备 | 第78-79页 |
| 1.2.7 质粒表达的检测 | 第79-81页 |
| 1.2.8 GV358-FAM178B慢病毒包装及滴度检测 | 第81页 |
| 1.2.9 慢病毒感染细胞 | 第81-82页 |
| 1.2.10 细胞克隆形成（Giemsa法） | 第82页 |
| 1.2.11 Transwell实验 | 第82-83页 |
| 1.2.12 细胞凋亡检测（Annexin V-APC单染法） | 第83页 |
| 1.2.13 统计学分析 | 第83页 |
| 2 实验结果 | 第83-91页 |
| 2.1 去甲基化实验 | 第83-84页 |
| 2.2 慢病毒载体构建 | 第84-86页 |
| 2.2.1 酶切结果 | 第84-85页 |
| 2.2.2 FAM178B过表达慢病毒载体的阳性克隆鉴定 | 第85-86页 |
| 2.2.3 过表达质粒的检测 | 第86页 |
| 2.3 慢病毒感染目的细胞 | 第86-87页 |
| 2.4 FAM178B过表达对食管鳞癌细胞克隆形成能力的影响 | 第87-88页 |
| 2.5 FAM178B过表达对食管鳞癌细胞侵袭能力的影响 | 第88-90页 |
| 2.6 FAM178B过表达对食管鳞癌细胞凋亡的影响 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-94页 |
| 4 小结 | 第94-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 附录A 缩略语表 | 第103-104页 |
| 附录B 综述 | 第104-115页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 在学研究成果 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
