| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| 1.1 甘露聚糖 | 第8-9页 |
| 1.2 β-甘露聚糖酶 | 第9-16页 |
| 1.2.1 β-甘露聚糖酶来源 | 第9-11页 |
| 1.2.2 β-甘露聚糖酶分类 | 第11页 |
| 1.2.3 β-甘露聚糖酶作用方式及水解产物 | 第11-12页 |
| 1.2.4 β-甘露聚糖酶相关酶类 | 第12页 |
| 1.2.5 β-甘露聚糖酶催化机制 | 第12页 |
| 1.2.6 β-甘露聚糖酶分子生物学进展 | 第12-13页 |
| 1.2.7 β-甘露聚糖酶分离纯化 | 第13-14页 |
| 1.2.8 β-甘露聚糖酶应用 | 第14-16页 |
| 1.3 本课题的研究意义 | 第16页 |
| 1.4 本课题的研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌种、质粒和引物 | 第17页 |
| 2.1.2 培养基和主要溶液 | 第17-19页 |
| 2.1.3 工具酶及相关试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-36页 |
| 2.2.1 β-甘露聚糖酶酶活的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.2 重组β-甘露聚糖酶蛋白含量的测定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 β-甘露聚糖酶产生菌的筛选 | 第23页 |
| 2.2.4 硫色曲霉β-甘露聚糖酶基因man的克隆 | 第23-27页 |
| 2.2.5 β-甘露聚糖酶基因man在E. coli Rosseta (DE3)中的表达 | 第27-29页 |
| 2.2.6 大肠杆菌表达β-甘露聚糖酶的酶学性质分析 | 第29-30页 |
| 2.2.7 β-甘露聚糖酶基因man在P.pastoris GS115中的表达 | 第30-33页 |
| 2.2.8 β-甘露聚糖酶的纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.9 酵母表达β-甘露聚糖酶的酶学性质 | 第34-35页 |
| 2.2.10 重组β-甘露聚糖酶的酶反应动力学 | 第35页 |
| 2.2.11 重组毕赤酵母5L罐高密度发酵 | 第35-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-55页 |
| 3.1 产β-甘露聚糖酶菌株的筛选 | 第36页 |
| 3.2 硫色曲霉中β-甘露聚糖酶基因的扩增 | 第36-38页 |
| 3.2.1 硫色曲霉RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.2.2 硫色曲霉β-甘露聚糖酶基因PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| 3.2.3 测序结果和序列分析 | 第38页 |
| 3.3 β-甘露聚糖酶基因man在E. coli Rosseta (DE3)中的表达及酶学性质分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 表达载体pET28a-man的构建 | 第38-40页 |
| 3.3.2 man在E.coli Rosseta (DE3)中的表达及检测 | 第40页 |
| 3.3.3 重组酶的最适温度及温度稳定性 | 第40-41页 |
| 3.3.4 重组酶的最适pH及pH稳定性 | 第41-42页 |
| 3.3.5 金属离子及试剂对重组酶的影响 | 第42-43页 |
| 3.4 β-甘露聚糖酶基因man在P.pastoris GS115中的表达 | 第43-46页 |
| 3.4.1 表达载体的构建 | 第43-45页 |
| 3.4.2 阳性转化子的筛选 | 第45-46页 |
| 3.4.3 重组酶摇瓶水平的表达 | 第46页 |
| 3.5 β-甘露聚糖酶的分离纯化 | 第46-49页 |
| 3.5.1 盐析 | 第46-47页 |
| 3.5.2 离子交换层析 | 第47-48页 |
| 3.5.3 凝胶过滤 | 第48-49页 |
| 3.6 重组毕赤酵母产β-甘露聚糖酶的酶学性质分析 | 第49-53页 |
| 3.6.1 底物浓度对重组酶酶活的影响 | 第49页 |
| 3.6.2 反应时间对重组酶酶活的影响 | 第49-50页 |
| 3.6.3 重组酶的最适温度及温度稳定性 | 第50-51页 |
| 3.6.4 重组酶的最适pH及pH稳定性 | 第51页 |
| 3.6.5 金属离子及试剂对重组酶的影响 | 第51-52页 |
| 3.6.6 重组酶对蛋白酶抗性的测定 | 第52页 |
| 3.6.7 重组酶的模拟仿生实验 | 第52-53页 |
| 3.7 重组毕赤酵母产β甘露聚糖酶的酶反应动力学 | 第53页 |
| 3.8 重组毕赤酵母5L罐高密度发酵 | 第53-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 5 展望 | 第56-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
