| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 RKOD DNA聚合酶在毕赤酵母中的分泌表达 | 第15-48页 |
| 1 文献综述 | 第15-26页 |
| 1.1 DNA聚合酶 | 第15-20页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第20-25页 |
| 1.3 目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| 2.1 材料 | 第26-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-39页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第39-48页 |
| 3.1 RKOD基因的优化与合成 | 第39页 |
| 3.2 RKOD DNA聚合酶的表达与纯化 | 第39-41页 |
| 3.3 RKOD的酶活分析 | 第41页 |
| 3.4 RKOD的糖基化分析 | 第41-42页 |
| 3.5 RKOD聚合酶的热稳定分析 | 第42-43页 |
| 3.6 RKOD的保真性分析 | 第43-44页 |
| 3.7 RKOD扩增效率的分析 | 第44-45页 |
| 3.8 两步法PCR的探索 | 第45-46页 |
| 3.9 结论 | 第46-48页 |
| 第二章 大体系PCR的建立 | 第48-55页 |
| 1 文献综述 | 第48-51页 |
| 1.1 PCR技术的定义 | 第48页 |
| 1.2 PCR发展简史 | 第48页 |
| 1.3 PCR技术的应用 | 第48-50页 |
| 1.4 大规模PCR的现状 | 第50页 |
| 1.5 目的与意义 | 第50-51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-52页 |
| 2.1 材料 | 第51页 |
| 2.2 方法 | 第51-52页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第52-55页 |
| 3.1 手动式大体系PCR | 第52-53页 |
| 3.2 连续流式大体系PCR | 第53-54页 |
| 3.3 结论 | 第54-55页 |
| 第三章 大规模PCR制备的线性禽流感DNA疫苗对小鼠保护效果的研究 | 第55-72页 |
| 1 文献综述 | 第55-60页 |
| 1.1 禽流感概述 | 第55页 |
| 1.2 禽流感HA | 第55-56页 |
| 1.3 禽流感对社会经济的危害 | 第56页 |
| 1.4 禽流感对人类健康的危害 | 第56-57页 |
| 1.5 禽流感疫苗的现状 | 第57-59页 |
| 1.6 DNA疫苗 | 第59-60页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-65页 |
| 2.1 材料 | 第60-61页 |
| 2.2 线性禽流感疫苗的制备 | 第61-62页 |
| 2.3 线性DNA体外转染哺乳动物细胞 | 第62页 |
| 2.4 细胞的裂解 | 第62页 |
| 2.5 Westrnblot检测目的蛋白表达 | 第62-63页 |
| 2.6 DNA疫苗免疫 | 第63页 |
| 2.7 免疫小鼠的全血采集与处理 | 第63页 |
| 2.8 ELISA检测小鼠血清特异性抗体 | 第63-64页 |
| 2.9 血凝抑制试验 | 第64页 |
| 2.10 小鼠淋巴细胞的分离 | 第64页 |
| 2.11 攻毒保护试验 | 第64页 |
| 2.12 肺部残余病毒量的检测 | 第64-65页 |
| 2.13 ELISPOT检测IFNγ表达情况 | 第65页 |
| 3 结果与讨论 | 第65-72页 |
| 3.1 线性DNA疫苗的制备 | 第65-66页 |
| 3.2 线性DNA疫苗的稳定性 | 第66-67页 |
| 3.3 线性DNA疫苗在哺乳动物细胞的表达 | 第67-68页 |
| 3.4 LEC-HA和PTO-LEC-HA在小鼠体内诱导的特异性抗体检测 | 第68-69页 |
| 3.5 LEC-HA和PTO-LEC-HA小鼠的HI抗体效价 | 第69页 |
| 3.6 细胞免疫水平 | 第69-70页 |
| 3.7 攻毒后小鼠肺部病毒滴度 | 第70页 |
| 3.8 攻毒后小鼠的存活与体重变化情况 | 第70-71页 |
| 3.9 小结 | 第71-72页 |
| 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 已发表的文章 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
