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仔猪肠致病性大肠杆菌的分离、鉴定及其菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
第一部分 文献综述第11-29页
 第一章 仔猪黄白痢的研究进展第11-15页
  1 仔猪黄白痢的病原学第11页
  2 仔猪黄白痢的发病特征第11-12页
  3 仔猪黄白痢的流行情况第12-13页
  参考文献第13-15页
 第二章 产肠毒素大肠杆菌菌毛的研究进展第15-23页
  1 菌毛的主要类型第15-17页
   ·F4菌毛第15页
   ·F5菌毛第15-16页
   ·F6菌毛第16-17页
  2 菌毛的生化特性第17页
  3 菌毛的表达条件第17页
  4 菌毛的流行病学分布第17-19页
  参考文献第19-23页
 第三章 仔猪黄白痢的防治第23-29页
  1 加强饲养管理第23页
  2 微生态制剂治疗第23页
  3 抗生素治疗第23-24页
  4 疫苗预防第24-27页
   ·全菌灭活疫苗第24-25页
   ·亚单位疫苗第25页
   ·基因工程疫苗第25-26页
   ·ETEC疫苗的展望第26-27页
  参考文献第27-29页
第二部分 试验研究第29-73页
 第四章 仔猪肠致病性大肠杆菌的分离和鉴定第29-39页
  1 材料与方法第29-32页
   ·病料样本采集第29-30页
   ·培养基第30页
   ·其他试剂第30页
   ·参考菌株第30页
   ·PCR引物第30-31页
   ·细菌的分离与纯培养第31页
   ·革兰氏染色镜检第31页
   ·生化试验第31-32页
   ·PCR模板的制备第32页
   ·PCR检测菌毛基因第32页
  2 结果第32-35页
   ·细菌分离和生化鉴定第32-33页
   ·分离菌株的菌毛基因检测第33-34页
   ·分离菌株的溶血性与菌毛类型的相关性第34-35页
  3 讨论第35-37页
  参考文献第37-39页
 第五章 产肠毒素大肠杆菌F4、F5和F6菌毛亚单位基因的克隆表达第39-59页
  1 材料与方法第39-46页
   ·菌株和质粒载体第39-40页
   ·主要试剂第40页
   ·目的基因的扩增第40-41页
   ·PCR产物的克隆与转化第41-43页
   ·目的蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测第43页
   ·重组蛋白表达形式的鉴定第43-44页
   ·重组蛋白的纯化与复性第44-45页
   ·纯化产物的Western-blot分析第45-46页
  2 结果第46-54页
   ·faeG、fanC及fasA的PCR扩增第46-48页
   ·重组原核表达质粒的构建第48-50页
   ·faeG、fanC、fasA基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的诱导表达第50-52页
   ·重组蛋白的纯化与复性第52-53页
   ·重组蛋白表达Western-blot鉴定第53-54页
  3 讨论第54-56页
  参考文献第56-59页
 第六章 产肠毒素大肠杆菌F4菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立及作用第59-73页
  1 材料与方法第60-63页
   ·血清及生化试剂第60页
   ·免疫血清的制备第60-61页
   ·间接ELISA方法条件的优化第61-62页
   ·间接ELISA方法临界值的确定第62页
   ·阻断试验第62页
   ·特异性试验第62页
   ·重复性试验第62-63页
   ·符合性试验第63页
   ·临床样品检测第63页
  2 结果第63-68页
   ·抗原包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定第63-64页
   ·血清最佳作用时间的确定第64页
   ·封闭液的确定第64页
   ·酶标二抗工作浓度和时间的确定第64-65页
   ·间接ELISA方法临界值的确定第65页
   ·阻断试验第65-66页
   ·特异性试验第66页
   ·重复性试验第66-67页
   ·符合性试验第67页
   ·临床猪血清检测第67-68页
  3 讨论第68-70页
  参考文献第70-73页
全文总结第73-75页
附录主要溶液及其配制方法第75-79页
致谢第79-81页
攻读学位期间发表的学术论文第81页

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