| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 插图和附表清单 | 第16-17页 |
| 英文缩写词表 | 第17-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-35页 |
| ·轮状病毒概况 | 第19页 |
| ·轮状病毒的分类与流行病学 | 第19-21页 |
| ·轮状病毒的分类 | 第19-20页 |
| ·轮状病毒的流行病学 | 第20-21页 |
| ·轮状病毒的基因组、结构与功能 | 第21-24页 |
| ·轮状病毒的基因组 | 第21页 |
| ·轮状病毒蛋白与功能 | 第21-24页 |
| ·轮状病毒生活周期 | 第24-27页 |
| ·轮状病毒的检测技术 | 第27-29页 |
| ·电镜检测技术 | 第27-28页 |
| ·免疫学检测技术 | 第28页 |
| ·基因检测技术 | 第28-29页 |
| ·传统PCR技术 | 第28页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第28-29页 |
| ·轮状病毒的动物模型 | 第29-31页 |
| ·无菌猪模型 | 第29-30页 |
| ·乳鼠模型 | 第30页 |
| ·树鼩模型 | 第30-31页 |
| ·原代细胞的分离与培养 | 第31-33页 |
| ·原代细胞的分离 | 第31-32页 |
| ·原代细胞的培养 | 第32-33页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第33-34页 |
| ·实验技术路线图 | 第34-35页 |
| 第二章 轮状病毒检测方法的建立 | 第35-47页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-38页 |
| ·引物与探针 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要实验设备 | 第36页 |
| ·标准品的构建 | 第36-37页 |
| ·TaqManPCR检测体系的建立 | 第37页 |
| ·TaqMan PCR引物和探针的设计 | 第37页 |
| ·试剂系统的选择,引物、探针浓度的优化 | 第37页 |
| ·TaqManPCR检测方法的评价 | 第37-38页 |
| ·方法特异性分析 | 第37页 |
| ·方法灵敏性分析 | 第37-38页 |
| ·方法重复性、稳定性分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-43页 |
| ·试剂系统的选择,引物、探针浓度的优化 | 第38-39页 |
| ·标准品的构建 | 第39-41页 |
| ·PC-VP6克隆载体的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| ·克隆载体体外转录后RNA拷贝数的确定 | 第40页 |
| ·TaqMan PCR工作曲线的建立 | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR方法的评价 | 第41-43页 |
| ·特异性分析 | 第41页 |
| ·灵敏性分析 | 第41-42页 |
| ·重复性和稳定性分析 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·本章小节 | 第45-47页 |
| 第三章 树鼩原代小肠上皮细胞的分离培养与鉴定 | 第47-57页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·材料与方法 | 第47-52页 |
| ·实验动物 | 第47-48页 |
| ·实验试剂及主要设备 | 第48-49页 |
| ·实验试剂及配方 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的分离 | 第49-50页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞培养 | 第50页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的纯化 | 第50页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的鉴定 | 第50-51页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的增殖情况 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-55页 |
| ·不同酶对树鼩原代小肠上皮细胞的分离结果 | 第52-53页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的纯化结果 | 第53-54页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的鉴定 | 第54页 |
| ·树鼩原代小肠上皮细胞的增殖结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 轮状病毒对树鼩原代小肠上皮细胞感染的鉴定及感染特性的研究 | 第57-79页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-59页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58页 |
| ·实验仪器 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-67页 |
| ·MA104细胞和轮状病毒培养 | 第59页 |
| ·MA104细胞的培养 | 第59页 |
| ·轮状病毒培养 | 第59页 |
| ·荧光定量PCR检测轮状病毒载量 | 第59-61页 |
| ·病毒RNA提取 | 第60页 |
| ·细胞培养上清中病毒拷贝数检测 | 第60-61页 |
| ·细胞培养上清病毒滴度检测 | 第61页 |
| ·轮状病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞最适感染复数的确定 | 第61-62页 |
| ·轮状病毒对树鼩原代小肠上皮细胞感染性的鉴定 | 第62-64页 |
| ·定性检测轮状病毒感染上清中病毒RNA | 第62页 |
| ·定量检测轮状病毒感染上清中病毒RNA | 第62-63页 |
| ·Western blot检测树鼩原代小肠上皮细胞中轮状病毒蛋白表达 | 第63页 |
| ·间接免疫荧光检测树鼩原代小肠上皮细胞中轮状病毒的表达 | 第63-64页 |
| ·轮状病毒在树鼩原代小肠上皮细胞上的感染特性 | 第64页 |
| ·轮状病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞的增殖曲线 | 第64页 |
| ·轮状病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞的适用性突变 | 第64-67页 |
| ·VP7区基因的扩增 | 第64-66页 |
| ·目的片段的富集与纯化 | 第66-67页 |
| ·目的片段的测序 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-75页 |
| ·轮状病毒培养增殖特性的研究 | 第67页 |
| ·轮状病毒感染特性的研究 | 第67-69页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞MOI的确定 | 第67-68页 |
| ·轮状病毒感染特性的研究 | 第68-69页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞对轮状病毒感染性的鉴定 | 第69-74页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞感染上清中的观察 | 第69-70页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞感染上清中的定性检测 | 第70-71页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞感染上清中的载量检测 | 第71-72页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞感染的Western blot检测 | 第72-73页 |
| ·树鼩小肠上皮细胞感染的间接免疫荧光检测 | 第73-74页 |
| ·轮状病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞适用性突变研究 | 第74-75页 |
| ·目的片段的扩增结果 | 第74页 |
| ·RVVP7区核酸及蛋白序列分析 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77-79页 |
| 第五章 结论 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录附录 | 第87-88页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第88页 |
