| 目录 | 第1-7页 |
| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 抗菌肽 | 第12-19页 |
| ·抗菌肽 | 第12-13页 |
| ·抗菌作用机理 | 第13-15页 |
| ·构效关系 | 第15-17页 |
| ·展望 | 第17-18页 |
| ·抗菌肽的基因工程表达 | 第18-19页 |
| 2 枯草芽孢杆菌 | 第19-22页 |
| ·枯草芽孢杆菌的概述 | 第19页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第19-21页 |
| ·枯草芽孢杆菌的生产应用 | 第21-22页 |
| 3 本试验的目的和意义 | 第22-24页 |
| 引言 | 第24-26页 |
| 第二章 抗菌肽的筛选和目的基因的获得 | 第26-34页 |
| 1 试验材料 | 第26-27页 |
| ·菌种及材料 | 第26页 |
| ·主要试验仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·抗菌肽的筛选及合成 | 第27-28页 |
| ·双层琼脂扩散方法检测合成多肽的抗菌活性 | 第28-29页 |
| ·抗菌肽基因的设计 | 第29页 |
| ·目的基因的获得 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-32页 |
| ·抗菌肽的筛选、合成及活性检测 | 第31页 |
| ·目的基因的获得 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体的构建 | 第34-44页 |
| 1 试验材料 | 第34-36页 |
| ·菌种及材料 | 第34页 |
| ·主要试验仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| ·质粒 pHT304 的提取 | 第36-37页 |
| ·pHT304 表达载体与目的基因的双酶切与连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·pHT304-PNK-19-3E 转化 | 第38页 |
| ·pHT304-PNK-19-3E 质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化及鉴定 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-42页 |
| ·pHT304-PNK-19-3E 重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·枯草芽孢杆菌 pHT304-PNK-19-3E 重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 目的蛋白的表达及鉴定 | 第44-54页 |
| 1 试验材料 | 第44-46页 |
| ·菌种及材料 | 第44页 |
| ·主要试验仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂的配制 | 第44-46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·目的蛋白的表达与蛋白电泳检测 | 第46页 |
| ·目的蛋白 PNK-19-3E 的纯化 | 第46页 |
| ·表达产物的 Western-blot 检测 | 第46-47页 |
| ·目的蛋白 PNK-19-3E 的酶解 | 第47页 |
| ·抗菌活性的鉴定以及电镜观察 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-51页 |
| ·不同诱导时间 Tricine-SDS-PAGE 结果 | 第48页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·表达产物的 Western blot 检测结果 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白抗菌活性的鉴定 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 全文结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附图 A 蛋白酶酶切位点 | 第62-63页 |
| 附图 B 氨基酸中英文对照及缩写 | 第63-64页 |
| 附图 C pHT304 载体图谱 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第68页 |
