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猪Dab1和Fyn基因的克隆、表达及调控细胞骨架重排的研究

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
主要缩略语表第12-13页
第一章 文献综述第13-30页
 1 Reelin信号途径第13-17页
   ·概述第13-14页
   ·Reelin信号级联反应第14-15页
   ·Reelin受体的不同功能第15-16页
   ·Reelin信号与疾病第16-17页
 2 接头蛋白Dab1第17-20页
   ·概述第17页
   ·Dab1在Reelin信号中的作用第17-18页
   ·Dab1的选择性剪接第18-20页
 3 酪氨酸蛋白激酶Fyn第20-22页
   ·概述第20-21页
   ·Fyn在Reelin信号中的作用第21页
   ·Fyn的选择性剪接第21-22页
 4 细胞肌动蛋白骨架第22-27页
   ·细胞运动中肌动蛋白丝的聚合与解聚第22-24页
   ·树突棘中的肌动蛋白第24-27页
 5 粘着斑及粘着斑激酶第27-30页
   ·粘着斑上的分子结构第27-28页
   ·粘着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)第28-30页
第二章 猪Dab1和Fyn基因的克隆、表达及染色体定位第30-47页
 1 前言第30-31页
 2 材料与方法第31-36页
   ·实验动物第31页
   ·RNA的制备与反转录第31页
   ·基因组DNA的提取第31页
   ·大肠杆菌感受态细胞的制备第31-32页
   ·基因的克隆第32-33页
   ·转化感受态第33页
   ·染色体定位第33-34页
     ·定位PCR第33-34页
     ·定位信号分析第34页
   ·实时荧光定量PCR第34-35页
   ·Leptomycin B(LMB)刺激实验第35-36页
 3 结果与分析第36-43页
   ·猪Dab1和Fyn基因不同剪接体的克隆第36-38页
   ·猪Dab1和Fyn基因的染色体定位第38页
   ·猪Dab1及Fyn基因剪接体的组织表达谱分析第38-40页
   ·sDab1与sFyn-B的时空表达谱分析第40-41页
   ·sDab1和sDab1-Li具有核质穿梭属性第41-43页
 4 讨论第43-47页
第三章 sDab1剪接体与sFyn相互作用的研究第47-55页
 1 前言第47页
 2 材料与方法第47-50页
   ·细胞系、抗体和抑制剂第47-48页
   ·海马神经元的原代培养第48页
   ·载体的构建及瞬时转染第48-49页
   ·Western blotting第49-50页
 3 结果与分析第50-54页
   ·原代神经元中sFyn-B与sDab1和sDab1-Li的共定位第50-51页
   ·sFyn磷酸化sDab1剪接体的特异位点第51-54页
 4 讨论第54-55页
第四章 Fyn调控细胞骨架重排的分子机理第55-83页
 1 前言第55-56页
 2 材料与方法第56-59页
   ·细胞系第56页
   ·载体的构建与瞬时转染第56-57页
   ·抗体第57-58页
   ·免疫荧光染色第58页
   ·Western blotting第58-59页
 3 结果与分析第59-81页
   ·Fyn导致细胞形态变化第59-60页
   ·细胞肌动蛋白重组与Fyn激酶活性第60-65页
   ·SH2和SH3结构域与Fyn介导的肌动蛋白骨架重排第65-73页
   ·蛋白共价修饰在Fyn介导的肌动蛋白重排中的作用第73-77页
   ·Fyn介导FAK磷酸化第77-79页
   ·Reelin上调SFKs介导的FAK的磷酸化第79-81页
 4 讨论第81-83页
第五章 Fyn对神经元树突骨架调控的研究第83-92页
 1 前言第83页
 2 材料与方法第83-86页
   ·细胞系、抗体和抑制剂第83-84页
   ·海马神经元的原代培养第84页
   ·Reelin条件培养基的收集第84页
   ·海马脑片培养第84-85页
   ·单细胞显微注射第85-86页
 3 结果与分析第86-89页
   ·Fyn促进神经元树突的分枝第86-87页
   ·Fyn增加海马锥体神经元的树突棘密度第87-89页
 4 讨论第89-92页
参考文献第92-109页
研究生期间论文发表情况第109-111页
致谢第111-112页
附录第112-113页

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