| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·生物还原反应简介 | 第13-14页 |
| ·羰基的生物还原 | 第14-23页 |
| ·生物催化羰基不对称还原的机理 | 第14页 |
| ·辅酶再生 | 第14-16页 |
| ·生物催化羰基不对称还原的研究方向 | 第16-20页 |
| ·生物催化羰基不对称还原的应用 | 第20-23页 |
| ·羧酸的生物还原 | 第23-26页 |
| ·生物催化羧酸还原的机理 | 第23页 |
| ·生物催化羧酸还原的研究现状及应用 | 第23-26页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第26页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第26-28页 |
| 第2章 羰基还原酶的挖掘 | 第28-39页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·常用试剂 | 第28页 |
| ·仪器与设备 | 第28页 |
| ·菌株与培养基 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·羰基还原酶基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·表达质粒的构建 | 第30页 |
| ·重组羰基还原酶的表达 | 第30-31页 |
| ·重组羰基还原酶的筛选 | 第31页 |
| ·辅酶依赖型的确定 | 第31页 |
| ·重组细胞还原2-氯苯乙酮 | 第31页 |
| ·产物检测方法 | 第31-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-37页 |
| ·羰基还原酶基因的挖掘 | 第32页 |
| ·羰基还原酶基因的克隆与表达质粒的构建 | 第32-34页 |
| ·重组羰基还原酶的表达 | 第34-35页 |
| ·重组羰基还原酶的筛选 | 第35-36页 |
| ·辅酶依赖型的确定 | 第36页 |
| ·重组细胞还原2-氯苯乙酮 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-39页 |
| 第3章 羰基还原酶的催化性能研究 | 第39-57页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料和方法 | 第39-44页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第39-40页 |
| ·重组菌的发酵培养及产酶 | 第40页 |
| ·重组还原酶的纯化 | 第40-41页 |
| ·酶活的测定 | 第41页 |
| ·蛋白含量测定 | 第41页 |
| ·重组羰基还原酶的表征 | 第41-42页 |
| ·外消旋醇的制备 | 第42-44页 |
| ·结果和讨论 | 第44-54页 |
| ·重组羰基还原酶的纯化 | 第44-45页 |
| ·蛋白分子量的测定 | 第45-46页 |
| ·温度和pH对酶活的影响 | 第46-49页 |
| ·金属离子和EDTA对酶活的影响 | 第49-50页 |
| ·有机溶剂对酶活的影响 | 第50-51页 |
| ·底物特异性和对映选择性 | 第51-53页 |
| ·动力学参数 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-57页 |
| 第4章 双酶共表达系统的构建 | 第57-71页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·实验材料和方法 | 第57-61页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第57页 |
| ·共表达质粒的构建 | 第57-60页 |
| ·重组菌的培养 | 第60-61页 |
| ·酶活的检测 | 第61页 |
| ·重组菌催化不对称还原反应 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-69页 |
| ·基因串联共表达系统的构建 | 第61-62页 |
| ·双质粒共表达系统的构建 | 第62-63页 |
| ·羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶的共表达 | 第63-64页 |
| ·共表达系统的比较 | 第64-66页 |
| ·重组菌表达条件的优化 | 第66-69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 第5章 手性羟基酯的酶法制备 | 第71-91页 |
| ·引言 | 第71-72页 |
| ·材料与方法 | 第72-73页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第72页 |
| ·邻氯苯甲酰甲酸甲酯的合成 | 第72页 |
| ·重组菌的发酵培养 | 第72页 |
| ·重组菌催化酮酯的不对称还原 | 第72-73页 |
| ·两相体系反应 | 第73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-89页 |
| ·重组菌的发酵培养 | 第73-74页 |
| ·重组菌催化合成手性羟基酯 | 第74-89页 |
| ·本章小结 | 第89-91页 |
| 第6章 生物催化羧酸还原 | 第91-113页 |
| ·前言 | 第91-92页 |
| ·材料与方法 | 第92-97页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第92页 |
| ·菌株及培养基 | 第92-93页 |
| ·分析方法 | 第93-95页 |
| ·P.furiosus的发酵培养 | 第95页 |
| ·P.furiosus催化羧酸还原 | 第95-96页 |
| ·羧酸还原体系的优化 | 第96页 |
| ·非水相体系中羧酸的还原 | 第96页 |
| ·CO驱动生物催化羧酸还原 | 第96-97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-112页 |
| ·羧酸还原体系的建立 | 第97页 |
| ·羧酸还原体系的优化 | 第97-101页 |
| ·P.furiosus催化3-苯丙酸还原的反应进程 | 第101页 |
| ·氢气驱动P.furiosus催化羧酸还原的底物谱 | 第101-106页 |
| ·不饱和伯醇的制备 | 第106-107页 |
| ·氢气压力对醛还原反应的影响 | 第107页 |
| ·非水相体系中羧酸的生物还原 | 第107-110页 |
| ·CO驱动P.furiosus催化羧酸还原 | 第110-112页 |
| ·本章小结 | 第112-113页 |
| 结论与展望 | 第113-116页 |
| 参考文献 | 第116-129页 |
| 附录 | 第129-137页 |
| 攻读博士期间撰写的论文及专利 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139页 |