| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 研究背景 | 第10-20页 |
| ·胰蛋白酶的研究历史与结构 | 第10-12页 |
| ·胰蛋白酶的激活与活性机理 | 第12-14页 |
| ·重组胰蛋白酶研究 | 第14-15页 |
| ·重组大肠杆菌的高密度发酵研究 | 第15-17页 |
| ·胰蛋白酶的突变体研究 | 第17-18页 |
| ·胰蛋白酶的性质和应用研究 | 第18-19页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-25页 |
| ·实验材料与设备 | 第20-21页 |
| ·常用实验材料 | 第20-21页 |
| ·常用实验设备 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·胰蛋白酶活性的检测 | 第21-22页 |
| ·结构分析 | 第22-23页 |
| ·常用技术服务支持 | 第23页 |
| ·质粒的转化 | 第23页 |
| ·大肠杆菌的破碎 | 第23页 |
| ·蛋白与核酸电泳 | 第23-25页 |
| 第3章 重组人阳离子型胰蛋白酶原的表达与高密度发酵 | 第25-34页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| ·载体与目的基因片段的双酶切 | 第26页 |
| ·连接与转化 | 第26-27页 |
| ·重组人阳离子型胰蛋白酶原的表达鉴定 | 第27页 |
| ·重组人阳离子型胰蛋白酶原的高密度细胞发酵 | 第27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-33页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·空载体质粒和目的基因的双酶切 | 第28页 |
| ·重组质粒的构建和转化 | 第28-29页 |
| ·重组人阳离子型胰蛋白酶原的表达 | 第29-30页 |
| ·发酵过程参数变化与调控 | 第30-31页 |
| ·发酵情况鉴定 | 第31-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第4章 重组人阳离子型胰蛋白酶的纯化与性质研究 | 第34-48页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·重组HTg1包涵体的复性 | 第34页 |
| ·重组HT1的纯化 | 第34-35页 |
| ·重组人阳离子型胰蛋白酶的冻干粉制备 | 第35页 |
| ·最适pH | 第35页 |
| ·pH稳定性 | 第35-36页 |
| ·最适温度 | 第36页 |
| ·温度稳定性 | 第36页 |
| ·底物优先性 | 第36页 |
| ·金属离子对重组胰蛋白酶稳定性研究 | 第36页 |
| ·紫外光谱吸收 | 第36页 |
| ·rHT1的K_m值与V_(max) | 第36页 |
| ·rHT1消化细胞实验 | 第36-37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-47页 |
| ·重组人阳离子型胰蛋白原的激活 | 第37页 |
| ·吸附条件的确定 | 第37-38页 |
| ·洗脱条件的确定 | 第38-39页 |
| ·CM-FF阳离子交换层析纯化rHT1 | 第39-40页 |
| ·rHT1的冻干粉制备 | 第40页 |
| ·最适pH | 第40-41页 |
| ·rHT1的pH稳定性 | 第41页 |
| ·rHT1的最适温度 | 第41-42页 |
| ·温度稳定性 | 第42-43页 |
| ·金属离子对rHT1稳定性的影响 | 第43-45页 |
| ·底物优先性 | 第45页 |
| ·rHT1的紫外吸收光谱 | 第45-46页 |
| ·rHT1的K_m值与V_(max) | 第46-47页 |
| ·rHT1的细胞消化实验 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第5章 二硫键Cys139-Cys206对人阳离子型胰蛋白酶稳定性的作用 | 第48-54页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·人阳离子型胰蛋白酶原突变体表达质粒的构建与表达 | 第48-49页 |
| ·mHTg1的重折叠 | 第49页 |
| ·mHT1的纯化 | 第49页 |
| ·温度稳定性 | 第49页 |
| ·pH稳定性 | 第49页 |
| ·结构分析 | 第49页 |
| ·实验结果与讨论 | 第49-53页 |
| ·重组人阳离子型胰蛋白酶原的点突变 | 第49-50页 |
| ·突变体mHT1的表达 | 第50-51页 |
| ·野生型与突变体稳定性的比较 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第6章 结论与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |