| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 1 引言 | 第7-13页 |
| ·抗菌肽 CAD 概论 | 第7-8页 |
| ·抗菌肽简介 | 第7页 |
| ·抗菌肽在饲料中的应用 | 第7-8页 |
| ·抗菌肽 CAD 基因表达的研究进展 | 第8-9页 |
| ·抗菌肽 CAD 的分泌表达 | 第8页 |
| ·抗菌肽 CAD 在大肠杆菌中的融合表达 | 第8-9页 |
| ·抗菌肽新型重组表达策略的研究进展 | 第9-12页 |
| ·乳酸克鲁维酵母表达系统的研究进展 | 第9-10页 |
| ·类弹性蛋白融合标签的研究进展 | 第10-11页 |
| ·SUMO 融合标签的研究进展 | 第11-12页 |
| ·课题研究意义和内容 | 第12-13页 |
| ·立题意义 | 第12页 |
| ·主要研究内容 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-20页 |
| ·实验材料与设备 | 第13-14页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·实验主要试剂 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13页 |
| ·仪器与设备 | 第13-14页 |
| ·试验方法 | 第14-20页 |
| ·分子克隆实验 | 第14页 |
| ·CAD 的基因设计 | 第14页 |
| ·质粒 pKLAC1-CAD 和 pKLAC1-CAD6H 的构建 | 第14页 |
| ·GG799/pKLAC1-CAD 和 GG799/pKLAC1-CAD6H 的构建 | 第14-15页 |
| ·K.Latis 重组菌的发酵培养 | 第15页 |
| ·Western Blot | 第15页 |
| ·BL21/pET28a-CELP-SUMO-CAD 的构建 | 第15-16页 |
| ·BL21/pET28a-6H-SUMO-CAD 的构建 | 第16-17页 |
| ·BL21/pET28a-CELP-ENK-CAD 的构建 | 第17页 |
| ·融合蛋白 CELP-SUMO-CAD 和 CELP-ENK-CAD 的表达 | 第17-18页 |
| ·融合蛋白 6H-SUMO-CAD 的诱导表达 | 第18页 |
| ·CELP 融合蛋白的离心循环纯化 | 第18页 |
| ·融合蛋白 6H-SUMO-CAD 的亲和纯化 | 第18页 |
| ·SUMO 融合蛋白的酶切和目的蛋白的纯化 | 第18页 |
| ·融合蛋白 CELP-ENK-CAD 的酶切和目的蛋白的纯化 | 第18-19页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第19页 |
| ·重组 CAD 活性的测定 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳 | 第19-20页 |
| 3 结果与讨论 | 第20-31页 |
| ·抗菌肽 CAD 在乳酸克鲁维酵母中的表达 | 第20-23页 |
| ·CAD 基因序列的合成 | 第20页 |
| ·质粒 pKLAC1-CAD 和 pKLAC1-CAD6H 的构建 | 第20-21页 |
| ·GG799/pKLAC1-CAD 和 GG799/pKLAC1-CAD6H 的构建 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白的分泌表达 | 第22-23页 |
| ·抗菌肽 CAD 在大肠杆菌中的融合表达 | 第23-31页 |
| ·BL21/pET28a-CELP-SUMO-CAD 的构建 | 第23页 |
| ·CELP-SUMO-CAD 的表达与纯化 | 第23-24页 |
| ·CELP-SUMO-CAD 的酶切 | 第24-25页 |
| ·BL21/pET28a-6H-SUMO-CAD 的构建 | 第25页 |
| ·融合蛋白 6H-SUMO-CAD 的亲和纯化与酶切 | 第25-26页 |
| ·BL21/pET28a-CELP-ENK-CAD 的构建 | 第26-27页 |
| ·融合蛋白 CELP-ENK-CAD 的纯化 | 第27页 |
| ·融合蛋白 CELP-ENK-CAD 的酶切和目的蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| ·重组抗菌肽 CAD 的活性检测 | 第28-29页 |
| ·三种融合表达策略的比较 | 第29-31页 |
| 主要结论 | 第31-32页 |
| 问题与展望 | 第32-33页 |
| 致谢 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 附录：研究生在学期间取得的学术成果 | 第38页 |
