| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| 一 哺乳动物体外受精研究进展 | 第12-20页 |
| 1 体外受精技术研究概况 | 第12页 |
| 2 卵母细胞体外成熟的因素 | 第12-16页 |
| ·卵母细胞的来源 | 第12-14页 |
| ·培养基 | 第14-16页 |
| ·外部培养条件 | 第16页 |
| 3 精子获能以及体外受精 | 第16-20页 |
| ·精子获能机理 | 第16页 |
| ·体外获能的方法 | 第16-18页 |
| ·精子获能标志及检测 | 第18页 |
| ·精子体外获能和体外受精的影响因素 | 第18-20页 |
| 二 胚胎干细胞研究进展 | 第20-29页 |
| 1 胚胎干细胞研究概况 | 第21页 |
| 2 胚胎干细胞生物学特性 | 第21页 |
| 3 胚胎干细胞分离法 | 第21-23页 |
| ·内细胞团来源的ES细胞分离 | 第21-22页 |
| ·PGCs来源的ES细胞分离 | 第22-23页 |
| ·细胞核移植法 | 第23页 |
| ·孤雌生殖法 | 第23页 |
| 4 影响胚胎干细胞的因素 | 第23-27页 |
| ·基础培养基 | 第23-24页 |
| ·血清对ES细胞的影响 | 第24页 |
| ·细胞因子 | 第24-26页 |
| ·饲养层细胞的选择 | 第26页 |
| ·条件培养基(CM) | 第26-27页 |
| 5 胚胎干细胞的鉴定 | 第27-29页 |
| ·根据形态和生长特性初步鉴定 | 第27页 |
| ·免疫学方法鉴定 | 第27-28页 |
| ·染色体鉴定 | 第28-29页 |
| ·全能型和多能性鉴定 | 第29页 |
| 三 研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 实验部分 | 第31-58页 |
| 实验1 双峰驼胎儿耳缘组织成纤维系的建立及生物学特性鉴定 | 第31-41页 |
| 1 材料和方法 | 第31-35页 |
| ·试剂与仪器 | 第31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| 2 结果 | 第35-39页 |
| ·不同培养方法培养原代成纤维细胞的结果 | 第35页 |
| ·消化分离法培养细胞的形态学观察 | 第35-36页 |
| ·冻存前及复苏后细胞活率 | 第36页 |
| ·免疫组织化学染色结果 | 第36页 |
| ·生长的动态观察 | 第36-37页 |
| ·染色体观察 | 第37-38页 |
| ·微生物污染检测结果 | 第38页 |
| ·GFP转染细胞的检测结果 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 实验2 双峰驼冷冻精液的制作与精液品质鉴定 | 第41-46页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·试剂与仪器 | 第41页 |
| ·主要溶液的配制 | 第41页 |
| ·采精前准备 | 第41页 |
| ·采精操作 | 第41-42页 |
| ·鲜精品质检查 | 第42页 |
| ·双峰驼冻精制作 | 第42-43页 |
| ·解冻检查 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-45页 |
| ·鲜精品质检测 | 第44页 |
| ·三种稀释液的比较 | 第44页 |
| ·不同平衡时间比较 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 实验3 双峰驼卵母细胞体外成熟及体外受精的研究 | 第46-53页 |
| 1 材料和方法 | 第46-50页 |
| ·试剂与仪器 | 第46页 |
| ·主要溶液配制 | 第46页 |
| ·制作卵母细胞培养皿 | 第46-47页 |
| ·采集卵巢和运输 | 第47页 |
| ·卵母细胞的收集 | 第47页 |
| ·卵母细胞分级 | 第47页 |
| ·卵母细胞体外成熟培养 | 第47页 |
| ·卵母细胞成熟鉴定 | 第47-48页 |
| ·精子洗涤及获能处理 | 第48-49页 |
| ·体外受精及受精卵体外发育培养 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50-51页 |
| ·采集方法对卵母细胞收集的影响 | 第50页 |
| ·FSH和LH的含量对卵母细胞体外成熟的影响 | 第50页 |
| ·E_2对卵母细胞体外成熟的影响 | 第50-51页 |
| ·体外受精液对卵裂率的影响 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 实验4 双峰驼胚胎干细胞的分离培养及初步鉴定 | 第53-58页 |
| 1 材料和方法 | 第53-54页 |
| ·试剂与仪器 | 第53页 |
| ·主要溶液配制 | 第53页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第53-54页 |
| ·胚胎干细胞的分离 | 第54页 |
| ·胚胎干细胞的培养 | 第54页 |
| ·胚胎干细胞的初步鉴定 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-56页 |
| ·两种饲养层细胞的生长状况 | 第54-55页 |
| ·不同处理方法对ES细胞原代集落的效果和 ES 细胞的传代培养 | 第55页 |
| ·不同饲养层对ES细胞培养的影响 | 第55-56页 |
| ·双峰驼ES细胞鉴定结果 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 导师简介 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |