| 摘要 | 第1-5页 |
| Summary | 第5-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 禽流感疫苗研究进展 | 第12-26页 |
| ·禽流感病毒的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·禽流感病毒的血凝素(HA)的特点 | 第13-15页 |
| ·HA的概述 | 第13页 |
| ·HA的结构及入侵过程 | 第13-14页 |
| ·HA蛋白与禽流感病毒毒力的关系 | 第14-15页 |
| ·针对HA蛋白的免疫研究 | 第15页 |
| ·我国禽流感流行特点 | 第15-18页 |
| ·我国总体的流行形势 | 第15-16页 |
| ·我国针对禽流感的免疫情况 | 第16-17页 |
| ·禽流感的防控 | 第17-18页 |
| ·禽流感与人流感的关系 | 第18-21页 |
| ·人类历史上的流感大流行 | 第18-19页 |
| ·产生大流感的病毒的可能机制 | 第19-20页 |
| ·禽流感在公共卫生学上的意义 | 第20-21页 |
| ·禽流感疫苗的研究 | 第21-22页 |
| ·灭活全病毒疫苗 | 第21页 |
| ·单位疫苗 | 第21页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第21-22页 |
| ·反向遗传操作疫苗 | 第22页 |
| ·DNA疫苗的研究进展 | 第22-26页 |
| ·DNA疫苗的概述 | 第22-23页 |
| ·佐剂的使用 | 第23-24页 |
| ·密码子的优化 | 第24页 |
| ·DNA疫苗的免疫途径 | 第24-26页 |
| 第二章 表达H5型AIV同义HA蛋白的质粒构建及免疫力测定 | 第26-51页 |
| ·材料与方法 | 第26-33页 |
| ·病毒株、灭活抗原及H5型阳性血清 | 第26页 |
| ·菌株、细胞及质粒 | 第26页 |
| ·SPF鸡胚和SPF鸡 | 第26页 |
| ·体外表达试验所用一抗及二抗 | 第26-27页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第27页 |
| ·表达同义H5型AIV的HA蛋白的重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·同义H5型AIV的HA氨基酸序列及分析 | 第27页 |
| ·Cons-HA5基因及载体pCAGGS的处理 | 第27页 |
| ·Cons-HA5基因片段与载体pCAGGS的连接 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的酶切及PCR鉴定 | 第28页 |
| ·阳性质粒pCACons-HA5的酶切鉴定 | 第28页 |
| ·阳性质粒pCACons-HA5的PCR鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的体外表达鉴定 | 第28-30页 |
| ·间接免疫荧光及观察 | 第28-29页 |
| ·293T-胞的培养及瞬时转染 | 第28页 |
| ·间接免疫荧光的观察 | 第28-29页 |
| ·western-blot分析 | 第29-30页 |
| ·转染用DNA的提取与纯化 | 第29页 |
| ·293T-胞的培养 | 第29页 |
| ·质粒的瞬时转染 | 第29页 |
| ·细胞的裂解 | 第29-30页 |
| ·western鉴定 | 第30页 |
| ·western内参处理 | 第30页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的免疫效力评估 | 第30-33页 |
| ·病毒的鸡胚半数致死量测定(EID_(50)) | 第30-31页 |
| ·病毒的TCID_(50)测定 | 第31页 |
| ·0.75%红细胞悬液的制备 | 第31页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的大量提取及纯化 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的转化 | 第31页 |
| ·阳性克隆的大量培养 | 第31页 |
| ·重组质粒的大量提取及纯化 | 第31-32页 |
| ·SPF鸡的免疫方法及程序 | 第32页 |
| ·试验用SPF鸡的分组及免疫情况 | 第32页 |
| ·病毒攻击及其分离 | 第32-33页 |
| ·凝抑制用8单位抗原配制 | 第33页 |
| ·HI抗体测定 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-49页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·EcoR Ⅰ和Sma Ⅰ双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·NcoⅠ与DraⅠ的单酶切鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5体外表达的鉴定 | 第35-37页 |
| ·间接免疫荧光的鉴定 | 第35-36页 |
| ·Western-blot鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pCACons-HA5的免疫效力评估 | 第37-49页 |
| ·病毒的鸡胚半数致死量测定(EID50) | 第37页 |
| ·组织半数感染量的测定(TCID50) | 第37-38页 |
| ·pCACons-HA5对H5型不同毒株攻击的保护力试验 | 第38-44页 |
| ·15μg剂量的pCACons-HA5对H5型不同毒株攻击的保护力试验 | 第38-41页 |
| ·30μg剂量的pCACons-HA5对H5型不同毒株攻击的保护力试验 | 第41-44页 |
| ·电转导方式对pCACons-HA5的免疫效力的影响试验 | 第44-47页 |
| ·15μg pCACons-HA5免疫持续期试验 | 第47-48页 |
| ·30μg pCACons-HA5免疫持续期试验 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 导师简介 | 第64-66页 |
