| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 第一章 牛精子冷冻损伤研究进展 | 第13-22页 |
| 引言 | 第13页 |
| ·冷冻-解冻过程对精子的损伤作用 | 第13-17页 |
| ·冷冻-解冻对精子质膜的影响 | 第13-14页 |
| ·影响精子质膜损伤程度的因素 | 第14页 |
| ·冷冻-解冻对精子顶体的影响 | 第14-15页 |
| ·冷冻-解冻对精子 DNA 的影响 | 第15-16页 |
| ·精浆对牛冷冻精液质量的影响 | 第16页 |
| ·精子的抗氧化系统 | 第16-17页 |
| ·增强精子抗氧化能力的方法 | 第17页 |
| ·精液冷冻损伤机理 | 第17-20页 |
| ·冷冻-解冻后精子中蛋白质的变化 | 第17-18页 |
| ·冷冻-解冻后精子相关基因的变化 | 第18-19页 |
| ·热应激蛋白对精子的保护原理 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| ·研究目的 | 第20-21页 |
| ·研究意义 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-40页 |
| 第二章 冷冻保存对牛精子 HSP90 表达量的影响 | 第22-27页 |
| 前言 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试验动物 | 第23页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第23页 |
| ·溶液的配置 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-24页 |
| ·精液的采集与冷冻 | 第23页 |
| ·精液解冻 | 第23页 |
| ·试验设计 | 第23-24页 |
| ·精子蛋白的提取 | 第24页 |
| ·Western blot 分析 | 第24页 |
| ·图像采集和数据分析 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-25页 |
| ·不同精液细管数与裂解液组合对蛋白浓度的影响 | 第24-25页 |
| ·不同冷冻阶段 HSP90 表达水平的变化 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| ·小结 | 第26-27页 |
| 第三章 HSP90 表达量与牛精子抗冻性关系研究 | 第27-34页 |
| 前言 | 第27页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试验动物 | 第27页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第27页 |
| ·溶液的配置 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·精液的采集与冷冻 | 第27-28页 |
| ·精液解冻 | 第28页 |
| ·精液品质检测 | 第28页 |
| ·试验设计 | 第28页 |
| ·精子蛋白的提取 | 第28-29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29页 |
| ·Western blot 分析 | 第29页 |
| ·图像采集和数据分析 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-32页 |
| ·冷冻-解冻牛精子活力、质膜完整性和顶体完整率 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE 的结果 | 第30页 |
| ·Western blot 结果 | 第30-31页 |
| ·HSP90 表达量与精子冷冻-解冻后质量参数的相关性 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第四章 牛精子抗冻关键基因筛选 | 第34-40页 |
| 前言 | 第34页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试验试剂 | 第34页 |
| ·试验仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·精液采集与冷冻 | 第34-35页 |
| ·精液解冻 | 第35页 |
| ·试验设计 | 第35页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·细胞中总 RNA 的提取以及实时荧光定量 PCR 引物检测 | 第36-37页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测各基因的 mRNA 表达量 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 附录 | 第47-53页 |
| 附录一 试验中所需各种溶液的配置 | 第47页 |
| 附录二 蛋白浓度检测及 Western Blot 分析方法 | 第47-50页 |
| 附录三 精子中 RNA 提取及琼脂糖凝胶电泳方法 | 第50-51页 |
| 附录四 cDNA 第一链的合成及 PCR 扩增 | 第51-52页 |
| 附录五 荧光实时定量 PCR | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
