| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-16页 |
| 1. 研究概况 | 第11页 |
| 2 附红细胞体病的流行特点与防治 | 第11-12页 |
| 3 猪附红细胞体病的诊断方法 | 第12-14页 |
| ·病原体形态学观察 | 第12-13页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第13页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第13页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第13页 |
| ·环介导等温扩增技术 | 第13-14页 |
| 4 基因文库的筛选策略 | 第14-15页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 材料与方法 | 第16-30页 |
| 1 材料 | 第16-20页 |
| ·试验样本 | 第16页 |
| ·载体和宿主菌株 | 第16页 |
| ·工具酶、试剂盒及其它试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·试验所用主要试剂及培养基的配制方法 | 第17-20页 |
| 2 方法 | 第20-30页 |
| ·猪附红细胞体基因组文库的大量扩增 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| ·猪附红细胞体基因组文库的转化 | 第21页 |
| ·猪附红细胞体基因组文库重组子的筛选 | 第21-22页 |
| ·插入基因的生物信息学分析 | 第22页 |
| ·猪附红细胞体JL-2基因片段引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第23页 |
| ·猪附红细胞体JL-2基因片段的克隆与鉴定 | 第23-24页 |
| ·猪附红细胞体JL-2基因片段原核表达载体的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第25页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白间接ELISA方法的建立 | 第27-30页 |
| 结果 | 第30-46页 |
| 1 猪附红细胞体基因组文库的转化 | 第30页 |
| 2 猪附红细胞体基因组文库重组子的筛选 | 第30-32页 |
| 3 猪附红细胞体JL-2基因的生物信息分析 | 第32-34页 |
| 4 猪附红细胞体JL-2基因片段的PCR扩增 | 第34页 |
| 5 重组克隆质粒的PCR及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 6 重组表达质粒的PCR及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 7 重组表达质粒的诱导表达 | 第36-37页 |
| 8 表达产物的Western blotting分析 | 第37-38页 |
| 9 重组蛋白的可溶性分析 | 第38-39页 |
| 10 重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| 11 间接ELISA检测方法的建立 | 第39-46页 |
| ·重组蛋白抗原最佳包被浓度与血清稀释度的筛选 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白抗原最佳包被条件的筛选 | 第40-41页 |
| ·最适封闭液及最佳封闭时间的筛选 | 第41-42页 |
| ·血清最佳作用时间的筛选 | 第42-43页 |
| ·酶标二抗最佳稀释倍数及作用时间的筛选 | 第43页 |
| ·底物最适显色时间的筛选 | 第43-44页 |
| ·间接ELISA阴、阳性临界值的确定 | 第44页 |
| ·特异性试验结果 | 第44-45页 |
| ·重复性试验结果 | 第45页 |
| ·临床样本检测结果 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 1. 基因组文库的筛选方法 | 第46-47页 |
| 2. 基因功能的研究策略 | 第47-48页 |
| 3. 重组蛋白的表达、纯化及ELISA试验 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |