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豆豉纤溶酶产生菌的筛选及基因的克隆与表达研究

中文摘要第1-8页
ABSTRACT第8-10页
缩略词第10-11页
第一章 文献综述第11-24页
   ·血栓性疾病及溶栓剂第11-15页
     ·血栓的形成及溶栓机制第11-13页
     ·溶栓剂的研究进展第13-15页
   ·豆豉纤溶酶研究概况第15-19页
     ·豆豉纤溶酶产生菌第15-16页
     ·豆豉纤溶酶理化性质第16-18页
     ·豆豉纤溶酶溶栓机制第18页
     ·豆豉纤溶酶基因的克隆表达第18-19页
   ·纤溶活性的测定第19-22页
     ·纤维蛋白平板法第19-20页
     ·纤维蛋白块溶解时间(CLT)法第20页
     ·四肽底物法第20页
     ·TAME 法第20-21页
     ·血清平板法第21页
     ·酶联免疫吸附法(ELISA)第21-22页
     ·聚丙烯酰胺纤维蛋白平板法第22页
   ·本研究的立题依据、研究内容和技术路线第22-24页
     ·立题依据第22页
     ·研究内容第22-23页
     ·技术路线第23-24页
第二章 豆豉纤溶酶产生菌的筛选及鉴定第24-42页
   ·材料与方法第24-33页
     ·材料第24页
     ·主要试剂第24-25页
     ·主要仪器第25页
     ·培养基第25-26页
     ·染色剂及生理生化鉴定试剂第26-27页
     ·豆豉纤溶酶产生菌的分离纯化及培养第27页
     ·冻融法提取纤维蛋白原第27-28页
     ·纤溶酶活性的比较与测定第28-29页
     ·菌株的保存第29页
     ·生理生化特征测试第29-31页
     ·细菌 16S rRNA 基因扩增及序列分析第31-33页
     ·16S rRNA 基因序列的系统进化树分析第33页
   ·结果与分析第33-40页
     ·豆豉纤溶酶产生菌的分离第33-35页
     ·分离菌株的鉴定第35-40页
   ·讨论第40-41页
   ·本章小结第41-42页
第三章 豆豉纤溶酶产生菌 HD4 发酵条件的研究第42-51页
   ·材料与方法第42-43页
     ·实验材料第42页
     ·主要试剂第42页
     ·主要仪器第42页
     ·培养基第42-43页
     ·菌种的保存与活化第43页
     ·菌体生长曲线的绘制第43页
     ·培养方法第43页
     ·纤溶酶活力的比较测定第43页
   ·结果与分析第43-49页
     ·生长曲线第43-44页
     ·发酵条件的确定第44-47页
     ·培养基组成的确定第47-49页
   ·讨论第49-50页
   ·本章小结第50-51页
第四章 豆豉纤溶酶全基因克隆及序列分析第51-63页
   ·材料和方法第51-58页
     ·实验材料第51-52页
     ·主要试剂第52页
     ·主要仪器第52-53页
     ·培养基第53页
     ·豆豉纤溶酶(DFE)基因的 PCR 扩增第53-54页
     ·豆豉纤溶酶基因的克隆第54-58页
     ·豆豉纤溶酶(DFE)全基因的序列测定及分析第58页
   ·结果与分析第58-62页
     ·豆豉纤溶酶基因的扩增第58页
     ·重组克隆载体的鉴定第58-60页
     ·豆豉纤溶酶全基因测序及序列分析第60-62页
   ·讨论第62页
   ·本章小结第62-63页
第五章 豆豉纤溶酶基因及纤溶酶原基因的原核表达研究第63-78页
   ·材料和方法第63-67页
     ·实验材料第63页
     ·主要试剂第63-64页
     ·主要仪器第64页
     ·培养基第64页
     ·豆豉纤溶酶原(pro-DFE)基因的 PCR 扩增第64-65页
     ·重组表达质粒的构建第65-66页
     ·外源基因的诱导表达第66-67页
   ·结果与分析第67-76页
     ·豆豉纤溶酶原(pro-DFE)基因的 PCR 扩增第67-68页
     ·重组表达质粒的构建及酶切分析第68-69页
     ·纤溶酶全基因及纤溶酶原基因的诱导表达第69-72页
     ·葡萄糖在诱导表达中的作用第72-76页
   ·讨论第76-77页
   ·本章小结第77-78页
结论第78-79页
参考文献第79-85页
致谢第85-86页
攻读学位期间发表的学术论文第86页

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