| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 一 前言 | 第9-19页 |
| 1.β地中海贫血症的背景 | 第9-11页 |
| 2.人类β珠蛋白基因简介 | 第11-12页 |
| 3.人类β珠蛋白基因表达调控因素 | 第12-14页 |
| 4.β地中海贫血的治疗策略 | 第14-18页 |
| ·输血治疗 | 第14页 |
| ·造血干细胞的移植 | 第14-15页 |
| ·基因治疗 | 第15-18页 |
| 5.课题意义 | 第18-19页 |
| 二 技术路线 | 第19-20页 |
| 三 实验仪器与材料 | 第20-24页 |
| 1.主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.主要试剂及配方 | 第20-22页 |
| 3.菌种、细胞和质粒 | 第22-24页 |
| 四 实验方法 | 第24-38页 |
| 1.LCR基因的克隆 | 第24-30页 |
| ·正常成人全血基因组DNA制备 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·LCR基因目的片段与pcDNA3.1-质粒载体的双酶切 | 第27-28页 |
| ·LCR基因目的片段与pcDNA3.1-质粒载体的连接 | 第28页 |
| ·pcDNA3.1-LCR重组质粒的转化、筛选、鉴定和大量制备 | 第28-30页 |
| 2.β 基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·β基因目的片段与pcDNA3.1—LCR质粒载体的双酶切 | 第31-32页 |
| ·β基因目的片段与pcDNA3.1-LCR质粒载体的连接 | 第32页 |
| ·pcDNA3.1-LCR-β重组质粒的转化、筛选、鉴定和大量制备 | 第32页 |
| 3.MEL细胞的转染 | 第32-34页 |
| ·MEL细胞的培养和传代 | 第32-33页 |
| ·转染用的重组质粒的制备 | 第33页 |
| ·重组质粒转染MEL细胞 | 第33-34页 |
| 4.转染后细胞的诱导 | 第34页 |
| 5.转染后细胞表达的检测 | 第34-38页 |
| ·RNA抽提 | 第34-35页 |
| ·RNA完整性的检测 | 第35页 |
| ·RNA的纯度检测及定量 | 第35页 |
| ·RNA的RT-PCR检测 | 第35-38页 |
| 五 实验结果 | 第38-44页 |
| 1.正常人全血基因组DNA制备 | 第38页 |
| 2.LCR及β基因的扩增 | 第38-39页 |
| 3.重组质粒pcDNA3.1-LCR—β的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 4.基因座控制区LCR和正常人β基因的测序 | 第40-41页 |
| 5.MEL细胞培养观察 | 第41页 |
| 6.G418筛选浓度的确定 | 第41页 |
| 7.细胞抗性筛选观察 | 第41-42页 |
| 8.RNA提取比较 | 第42-43页 |
| 9.RT-PCR检测人β基因在MEL细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 六 讨论 | 第44-48页 |
| 七 结论 | 第48-49页 |
| 八 参考文献 | 第49-54页 |
| 九 英文缩略词汇 | 第54-56页 |
| 十 附录 | 第56-62页 |
| 附录1 LCR基因全长测序结果 | 第56-59页 |
| 附录2 β基因全长测序结果 | 第59-60页 |
| 附录3 β基因的mRNA | 第60-61页 |
| 附录4 研究生期间已发表论文 | 第61-62页 |
| 十一 致谢 | 第62页 |
