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蛙虹彩病毒(RGV)的复制与宿主细胞骨架及超微组织变化

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-13页
第一章 文献综述第13-36页
 第一节 电子显微镜技术在病毒学中的应用第13-16页
     ·透射电镜技术第13-16页
       ·超薄切片技术第13-14页
       ·负染色技术第14页
       ·免疫电镜技术第14-16页
       ·电镜计数第16页
     ·扫描电镜技术第16页
 第二节 哺乳动物病毒的装配及病毒与宿主细胞的相互作用第16-27页
     ·病毒的装配第17-20页
     ·病毒感染对宿主大分子合成及功能的影响第20-23页
       ·病毒对宿主蛋白合成的抑制第20-21页
       ·病毒对宿主转录干扰第21-22页
       ·病毒对宿主DNA 合成的影响第22-23页
     ·病毒感染对细胞成分的影响第23-26页
       ·病毒感染与细胞膜第23页
       ·病毒感染与细胞骨架第23-25页
       ·病毒感染与线粒体第25-26页
     ·病毒感染与细胞凋亡第26-27页
 第三节 水生动物虹彩病毒复制和病毒与宿主细胞的相互作用第27-34页
     ·虹彩病毒生物学特性和分类第27-28页
     ·蛙虹彩病毒的复制第28-31页
       ·病毒的吸附和进入第28-29页
       ·病毒的复制、转录和翻译第29-30页
       ·病毒的装配与释放第30-31页
     ·虹彩病毒与宿主细胞的相互作用第31-34页
       ·病毒感染与宿主细胞大分子合成第31-32页
       ·病毒感染与细胞骨架第32页
       ·病毒感染与线粒体第32-33页
       ·病毒感染与细胞调亡第33-34页
 第四节 本研究的背景及目的意义第34-36页
第二章 RGV 装配区的定性和定量分析第36-50页
   ·前言第36页
   ·材料和方法第36-37页
     ·细胞和病毒第36-37页
     ·感染细胞超薄切片制样第37页
     ·病毒感染时序及装配区的定量分析第37页
   ·结果第37-48页
     ·RGV 感染时序的定量分析第37-39页
     ·RGV 装配区的超微结构观察第39-44页
     ·装配区的定量分析第44-45页
     ·病毒装配中间体多样性观察第45-48页
   ·讨论第48-50页
第三章 RGV 感染鱼类细胞免疫电镜方法的建立及其应用第50-68页
   ·前言第50页
   ·材料和方法第50-54页
     ·病毒扩增和提纯第50-51页
     ·负染制样第51页
     ·RGV 抗体制备第51页
     ·RGV 抗体效价检测第51-52页
       ·琼脂凝胶免疫扩散法第51页
       ·酶联免疫吸附测定法(ELISA)第51-52页
     ·免疫电镜制样第52-54页
       ·样品制备第52页
       ·切片的免疫染色第52-53页
       ·定量分析免疫标记强度第53-54页
     ·免疫荧光显微镜样品的制备第54页
   ·结果第54-65页
     ·提纯病毒的电镜负染观察第54-55页
     ·抗体效价的测定第55页
     ·免疫电镜不同制样方法对样品观察的影响第55-59页
       ·样品超微结构观察第55-58页
       ·样品免疫染色观察第58-59页
     ·感染细胞的免疫染色观察第59-62页
       ·RGV 装配阶段的免疫电镜观察第59-62页
       ·RGV 成熟阶段的免疫电镜观察第62页
     ·两种鱼类细胞中RGV 的装配第62-65页
   ·讨论第65-68页
第四章 宿主细胞微管的形态变化及对 RGV 释放过程的影响第68-76页
   ·前言第68页
   ·材料和方法第68-70页
     ·病毒、细胞、试剂和抗体第68-69页
     ·细胞活力测定第69页
       ·台盼兰排除法第69页
     ·荧光显微镜样品制备第69页
     ·超薄切片制样和定量分析第69-70页
     ·病毒产量的测定第70页
       ·空斑法第70页
   ·结果第70-74页
     ·秋水仙素对细胞活力影响第70页
     ·微管形态的变化第70-72页
     ·秋水仙素处理后微管形态和病毒装配第72-73页
     ·秋水仙素处理对病毒产量的影响第73-74页
   ·讨论第74-76页
第五章 宿主细胞中等纤维及微丝对 RGV 感染的影响第76-85页
   ·前言第76-77页
   ·材料与方法第77-78页
     ·病毒、细胞和试剂第77页
     ·细胞活力测定第77页
     ·超薄切片制样和定量分析第77-78页
     ·病毒产量的测定第78页
   ·结果第78-83页
     ·试剂对细胞活力的影响第78页
     ·EPC 细胞内RGV 装配区超微结构观察第78-80页
     ·RGV 释放的电镜观察第80-82页
     ·丙烯酰胺和EGTA 分别对病毒产量的影响第82-83页
   ·讨论第83-85页
第六章 RGV 感染与线粒体的关系第85-99页
   ·前言第85-86页
   ·材料与方法第86-89页
     ·病毒、细胞和试剂第86页
     ·质粒提取和细胞转染第86-87页
       ·pDsRed2-Mito 质粒的提取第86页
       ·pDsRed2-Mito 在FHM 细胞系中的稳定转染第86-87页
     ·细胞培养与病毒感染第87页
     ·荧光显微镜样品的制备第87页
     ·电镜样品制备和定量分析第87-88页
     ·线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, Δψm)检测第88页
     ·线粒体呼吸(mitochondrial respiration, MR)检测第88页
     ·Caspase-3 活性测定第88-89页
   ·结果第89-96页
     ·线粒体超微结构观察的第89-91页
     ·细胞内线粒体的分布第91-95页
     ·线粒体Δψm 和线粒体呼吸的变化第95-96页
     ·Caspase-3 活性检测第96页
   ·讨论第96-99页
总结第99-101页
参考文献第101-122页
附录攻读博士学位期间发表论文目录第122-123页
致谢第123页

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