中文摘要 | 第1-5页 |
英文摘要 | 第5-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-36页 |
第一节 电子显微镜技术在病毒学中的应用 | 第13-16页 |
·透射电镜技术 | 第13-16页 |
·超薄切片技术 | 第13-14页 |
·负染色技术 | 第14页 |
·免疫电镜技术 | 第14-16页 |
·电镜计数 | 第16页 |
·扫描电镜技术 | 第16页 |
第二节 哺乳动物病毒的装配及病毒与宿主细胞的相互作用 | 第16-27页 |
·病毒的装配 | 第17-20页 |
·病毒感染对宿主大分子合成及功能的影响 | 第20-23页 |
·病毒对宿主蛋白合成的抑制 | 第20-21页 |
·病毒对宿主转录干扰 | 第21-22页 |
·病毒对宿主DNA 合成的影响 | 第22-23页 |
·病毒感染对细胞成分的影响 | 第23-26页 |
·病毒感染与细胞膜 | 第23页 |
·病毒感染与细胞骨架 | 第23-25页 |
·病毒感染与线粒体 | 第25-26页 |
·病毒感染与细胞凋亡 | 第26-27页 |
第三节 水生动物虹彩病毒复制和病毒与宿主细胞的相互作用 | 第27-34页 |
·虹彩病毒生物学特性和分类 | 第27-28页 |
·蛙虹彩病毒的复制 | 第28-31页 |
·病毒的吸附和进入 | 第28-29页 |
·病毒的复制、转录和翻译 | 第29-30页 |
·病毒的装配与释放 | 第30-31页 |
·虹彩病毒与宿主细胞的相互作用 | 第31-34页 |
·病毒感染与宿主细胞大分子合成 | 第31-32页 |
·病毒感染与细胞骨架 | 第32页 |
·病毒感染与线粒体 | 第32-33页 |
·病毒感染与细胞调亡 | 第33-34页 |
第四节 本研究的背景及目的意义 | 第34-36页 |
第二章 RGV 装配区的定性和定量分析 | 第36-50页 |
·前言 | 第36页 |
·材料和方法 | 第36-37页 |
·细胞和病毒 | 第36-37页 |
·感染细胞超薄切片制样 | 第37页 |
·病毒感染时序及装配区的定量分析 | 第37页 |
·结果 | 第37-48页 |
·RGV 感染时序的定量分析 | 第37-39页 |
·RGV 装配区的超微结构观察 | 第39-44页 |
·装配区的定量分析 | 第44-45页 |
·病毒装配中间体多样性观察 | 第45-48页 |
·讨论 | 第48-50页 |
第三章 RGV 感染鱼类细胞免疫电镜方法的建立及其应用 | 第50-68页 |
·前言 | 第50页 |
·材料和方法 | 第50-54页 |
·病毒扩增和提纯 | 第50-51页 |
·负染制样 | 第51页 |
·RGV 抗体制备 | 第51页 |
·RGV 抗体效价检测 | 第51-52页 |
·琼脂凝胶免疫扩散法 | 第51页 |
·酶联免疫吸附测定法(ELISA) | 第51-52页 |
·免疫电镜制样 | 第52-54页 |
·样品制备 | 第52页 |
·切片的免疫染色 | 第52-53页 |
·定量分析免疫标记强度 | 第53-54页 |
·免疫荧光显微镜样品的制备 | 第54页 |
·结果 | 第54-65页 |
·提纯病毒的电镜负染观察 | 第54-55页 |
·抗体效价的测定 | 第55页 |
·免疫电镜不同制样方法对样品观察的影响 | 第55-59页 |
·样品超微结构观察 | 第55-58页 |
·样品免疫染色观察 | 第58-59页 |
·感染细胞的免疫染色观察 | 第59-62页 |
·RGV 装配阶段的免疫电镜观察 | 第59-62页 |
·RGV 成熟阶段的免疫电镜观察 | 第62页 |
·两种鱼类细胞中RGV 的装配 | 第62-65页 |
·讨论 | 第65-68页 |
第四章 宿主细胞微管的形态变化及对 RGV 释放过程的影响 | 第68-76页 |
·前言 | 第68页 |
·材料和方法 | 第68-70页 |
·病毒、细胞、试剂和抗体 | 第68-69页 |
·细胞活力测定 | 第69页 |
·台盼兰排除法 | 第69页 |
·荧光显微镜样品制备 | 第69页 |
·超薄切片制样和定量分析 | 第69-70页 |
·病毒产量的测定 | 第70页 |
·空斑法 | 第70页 |
·结果 | 第70-74页 |
·秋水仙素对细胞活力影响 | 第70页 |
·微管形态的变化 | 第70-72页 |
·秋水仙素处理后微管形态和病毒装配 | 第72-73页 |
·秋水仙素处理对病毒产量的影响 | 第73-74页 |
·讨论 | 第74-76页 |
第五章 宿主细胞中等纤维及微丝对 RGV 感染的影响 | 第76-85页 |
·前言 | 第76-77页 |
·材料与方法 | 第77-78页 |
·病毒、细胞和试剂 | 第77页 |
·细胞活力测定 | 第77页 |
·超薄切片制样和定量分析 | 第77-78页 |
·病毒产量的测定 | 第78页 |
·结果 | 第78-83页 |
·试剂对细胞活力的影响 | 第78页 |
·EPC 细胞内RGV 装配区超微结构观察 | 第78-80页 |
·RGV 释放的电镜观察 | 第80-82页 |
·丙烯酰胺和EGTA 分别对病毒产量的影响 | 第82-83页 |
·讨论 | 第83-85页 |
第六章 RGV 感染与线粒体的关系 | 第85-99页 |
·前言 | 第85-86页 |
·材料与方法 | 第86-89页 |
·病毒、细胞和试剂 | 第86页 |
·质粒提取和细胞转染 | 第86-87页 |
·pDsRed2-Mito 质粒的提取 | 第86页 |
·pDsRed2-Mito 在FHM 细胞系中的稳定转染 | 第86-87页 |
·细胞培养与病毒感染 | 第87页 |
·荧光显微镜样品的制备 | 第87页 |
·电镜样品制备和定量分析 | 第87-88页 |
·线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, Δψm)检测 | 第88页 |
·线粒体呼吸(mitochondrial respiration, MR)检测 | 第88页 |
·Caspase-3 活性测定 | 第88-89页 |
·结果 | 第89-96页 |
·线粒体超微结构观察的 | 第89-91页 |
·细胞内线粒体的分布 | 第91-95页 |
·线粒体Δψm 和线粒体呼吸的变化 | 第95-96页 |
·Caspase-3 活性检测 | 第96页 |
·讨论 | 第96-99页 |
总结 | 第99-101页 |
参考文献 | 第101-122页 |
附录攻读博士学位期间发表论文目录 | 第122-123页 |
致谢 | 第123页 |