| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-41页 |
| 0 引言 | 第17页 |
| 1 弹性蛋白酶的分布 | 第17-18页 |
| 2 微生物源弹性蛋白酶的研究进展 | 第18-22页 |
| 2．1 弹性蛋白酶的微生物来源 | 第18-21页 |
| 2．2 发酵大豆液及豆制品中的微生物源弹性蛋白酶 | 第21-22页 |
| 2．3 细胞培养获得弹性蛋白酶 | 第22页 |
| 3 微生物源弹性蛋白酶的性质 | 第22-31页 |
| 3．1 弹性蛋白酶的理化性质 | 第22页 |
| 3．2 弹性蛋白酶的结构及特点 | 第22-26页 |
| 3．3 弹性蛋白酶降解弹性蛋白 | 第26-29页 |
| 3．3．1 弹性蛋白的性质和结构 | 第26页 |
| 3．3．2 弹性蛋白酶降解弹性蛋白机理研究进展 | 第26-29页 |
| 3．4 弹性蛋白酶降解其他蛋白的研究进展 | 第29-31页 |
| 3．4．1 弹性蛋白酶降解酪蛋白 | 第29-30页 |
| 3．4．2 弹性蛋白酶降解丝素蛋白 | 第30-31页 |
| 4 弹性蛋白酶的分子生物学研究进展 | 第31-34页 |
| 4．1 弹性蛋白酶基因的克隆和表达 | 第31-33页 |
| 4．2 蛋白质工程改造弹性蛋白酶 | 第33-34页 |
| 4．3 化学修饰弹性蛋白酶 | 第34页 |
| 5 弹性蛋白酶的功能与用途 | 第34-39页 |
| 5．1 在医药领域的应用 | 第34-36页 |
| 5．1．1 降低胆固醇、抑制粥样动脉硬化的作用 | 第35页 |
| 5．1．2 抑制脂肪肝的形成，增强肝中脂肪分解作用 | 第35-36页 |
| 5．1．3 预防和治疗糖尿病肾脏病的理想药物 | 第36页 |
| 5．2 在食品工业中的应用 | 第36-38页 |
| 5．2．1 肉类嫩化剂 | 第36-37页 |
| 5．2．2 在食品中的潜在应用 | 第37-38页 |
| 5．3 弹性蛋白酶在日用化工中应用 | 第38页 |
| 5．4 生物杀虫剂的辅助剂 | 第38-39页 |
| 6 选题背景及研究内容 | 第39-41页 |
| 第二章 弹性蛋白酶的发酵条件优化 | 第41-62页 |
| 0 引言 | 第41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| 1．1 实验材料 | 第41页 |
| 1．2 主要仪器 | 第41-42页 |
| 1．3 培养方法 | 第42-43页 |
| 1．3．1 种子培养 | 第42页 |
| 1．3．2 不同温度下发酵培养 | 第42页 |
| 1．3．3 5L发酵罐内不同pH分批发酵培养 | 第42-43页 |
| 1．3．4 5L发酵罐内不同搅拌转速分批发酵培养 | 第43页 |
| 1．4 分析方法 | 第43-44页 |
| 1．4．1 生物量 | 第43页 |
| 1．4．2 还原糖 | 第43页 |
| 1．4．3 pH | 第43页 |
| 1．4．4 酶活力 | 第43-44页 |
| 2 结果和讨论 | 第44-61页 |
| 2．1 不同温度对弹性蛋白酶发酵的影响 | 第44-49页 |
| 2．1．1 不同温度对弹性蛋白酶摇瓶发酵的影响 | 第44-45页 |
| 2．1．2 温度对于发酵过程影响的动力学分析 | 第45-47页 |
| 2．1．3 变温发酵策略 | 第47页 |
| 2．1．4 不同培养模式的比较 | 第47-49页 |
| 2．2 pH对弹性蛋白酶分批发酵的影响 | 第49-56页 |
| 2．2．1 培养过程中未控制pH的弹性蛋白酶分批发酵 | 第49-50页 |
| 2．2．2 恒定pH分批发酵过程分析 | 第50-55页 |
| 2．2．3 pH分段控制策略的探讨 | 第55-56页 |
| 2．3 搅拌转速对弹酶分批发酵的影响 | 第56-61页 |
| 2．3．1 搅拌转速对生物量的影响 | 第57页 |
| 2．3．2 搅拌转速对酶活力的影响 | 第57-58页 |
| 2．3．3 搅拌转速对残糖的影响 | 第58-59页 |
| 2．3．4 搅拌转速对泡沫的影响 | 第59页 |
| 2．3．5 搅拌转速对发酵过程影响的动力学分析 | 第59-61页 |
| 3 小结 | 第61-62页 |
| 第三章 70L发酵罐分批发酵及动力学模型的建立 | 第62-75页 |
| 0 引言 | 第62页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 1．1 实验材料 | 第62页 |
| 1．2 培养基与培养方法 | 第62-63页 |
| 1．2．1 培养基 | 第62页 |
| 1．2．2 培养方法和发酵条件 | 第62-63页 |
| 1．3 分析方法 | 第63页 |
| 1．4 主要仪器 | 第63页 |
| 2 Bacillus sp. EL31410中试扩大培养和动力学模型的建立 | 第63-68页 |
| 2．1 Bacillus sp. EL31410中试扩大培养 | 第63-65页 |
| 2．2 发酵动力学模型的建立 | 第65-68页 |
| 3 结果和讨论 | 第68-73页 |
| 3．1 Bacillus sp. EL31410中试扩大培养发酵过程分析 | 第68-69页 |
| 3．2 动力学模型的建立及各参数的估计 | 第69-73页 |
| 3．2．1 Bacillus sp. EL31410生长动力学 | 第69-70页 |
| 3．2．2 弹性蛋白酶生成动力学 | 第70-72页 |
| 3．2．3 葡萄糖消耗动力学 | 第72-73页 |
| 4 小结 | 第73-75页 |
| 第四章 弹性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第75-88页 |
| 0 引言 | 第75页 |
| 1 材料和方法 | 第75-78页 |
| 1．1 实验菌株 | 第75页 |
| 1．2 主要仪器 | 第75-76页 |
| 1．3 发酵培养基和培养方法 | 第76页 |
| 1．4 分析方法 | 第76页 |
| 1．5 盐析及分级盐析方法 | 第76-77页 |
| 1．6 离子交换柱层析 | 第77页 |
| 1．7 凝胶过滤柱层析 | 第77页 |
| 1．8 弹性蛋白酶酶学性质研究方法 | 第77-78页 |
| 1．8．1 弹性蛋白酶热稳定性的测定 | 第77页 |
| 1．8．2 弹性蛋白酶pH稳定性的测定 | 第77-78页 |
| 1．8．3 金属离子对弹性蛋白酶活性的影响 | 第78页 |
| 1．8．4 弹性蛋白酶降解其他蛋白 | 第78页 |
| 1．8．5 SDS-PAGE电泳 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-87页 |
| 2．1 弹性蛋白酶的纯化 | 第78-81页 |
| 2．1．1 盐析法 | 第78-79页 |
| 2．1．2 DEAE-Sephadex A 50离子交换柱层析 | 第79-80页 |
| 2．1．3 凝胶过滤层析 | 第80-81页 |
| 2．2 弹性蛋白酶酶学性质分析 | 第81-87页 |
| 2．2．1 弹性蛋白酶纯度及分子量的测定 | 第81-82页 |
| 2．2．2 酶的最适作用温度和热稳定性 | 第82-84页 |
| 2．2．3 酶的最适作用pH和酸碱稳定性 | 第84-85页 |
| 2．2．4 金属离子对酶活性的影响 | 第85-86页 |
| 2．2．5 弹性蛋白酶对天然蛋白质的分解 | 第86-87页 |
| 3 小结 | 第87-88页 |
| 第五章 弹性蛋白酶的热稳定性及保存寿命估算 | 第88-100页 |
| 0 引言 | 第88页 |
| 1 材料和方法 | 第88-90页 |
| 1．1 弹性蛋白酶粗酶液的制备 | 第88-89页 |
| 1．2 主要仪器 | 第89页 |
| 1．3 保护剂的筛选 | 第89页 |
| 1．4 复合保护剂的添加对于弹性蛋白酶热稳定性的影响 | 第89页 |
| 1．5 复合保护剂的添加对于弹性蛋白酶pH稳定性的影响 | 第89-90页 |
| 1．6 弹性蛋白酶制剂的加速试验 | 第90页 |
| 1．7 检测方法 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-98页 |
| 2．1 不同物质对弹性蛋白酶热稳定性的影响 | 第90-92页 |
| 2．2 保护剂浓度对弹性蛋白酶热稳定性的影响 | 第92-93页 |
| 2．3 复合保护剂配方的优化 | 第93-94页 |
| 2．4 复合保护剂的添加对于弹性蛋白酶热稳定性的影响 | 第94页 |
| 2．5 复合保护剂的添加对于弹性蛋白酶pH稳定性的影响 | 第94-95页 |
| 2．6 加速试验估算弹性蛋白酶的贮存寿命 | 第95-98页 |
| 2．6．1 弹性蛋白酶的热降解速度 | 第96-97页 |
| 2．6．2 弹性蛋白酶的贮存寿命估算 | 第97-98页 |
| 3 小结 | 第98-100页 |
| 第六章 双水相体系纯化弹性蛋白酶 | 第100-114页 |
| 0 引言 | 第101页 |
| 1 材料和方法 | 第101-103页 |
| 1．1 仪器设备 | 第101页 |
| 1．2 粗酶液的制备 | 第101-102页 |
| 1．2．1 培养基 | 第101页 |
| 1．2．2 培养方法 | 第101-102页 |
| 1．3 双水相体系的制备 | 第102页 |
| 1．4 分析方法 | 第102页 |
| 1．5 试验设计 | 第102-103页 |
| 1．5．1 全因子试验 | 第102页 |
| 1．5．2 最陡爬坡试验 | 第102页 |
| 1．5．3 中心组合试验 | 第102-103页 |
| 1．6 主要评价指标 | 第103页 |
| 1．7 从PEG中回收弹性蛋白酶 | 第103页 |
| 2 结果与讨论 | 第103-111页 |
| 2．1 PEG／盐体系的选择 | 第103-104页 |
| 2．2 pH对PEG／KH_2PO_4-K_2HPO_4体系中弹性蛋白酶分配的影响 | 第104-106页 |
| 2．3 PEG分子量对PEG／磷酸盐体系中弹性蛋白酶分配的影响 | 第106页 |
| 2．4 NaCl对于PEG／磷酸盐体系中弹性蛋白酶分配的影响 | 第106-107页 |
| 2．5 PEG和磷酸盐浓度对弹性蛋白酶分配的影响 | 第107-111页 |
| 2．5．1 全因子试验设计(FFD)与分析 | 第107-108页 |
| 2．5．2 最陡爬坡试验 | 第108-109页 |
| 2．5．3 中心组合试验设计(CCD)及响应面分析 | 第109-111页 |
| 3 弹性蛋白酶的回收 | 第111-112页 |
| 4 小结 | 第112-114页 |
| 第七章 弹性蛋白酶水解丝素蛋白 | 第114-128页 |
| 0 引言 | 第114-115页 |
| 1 材料和方法 | 第115-117页 |
| 1．1 材料 | 第115-116页 |
| 1．1．1 可溶性丝素粉末的制备 | 第115页 |
| 1．1．2 酶制剂 | 第115页 |
| 1．1．3 主要仪器 | 第115-116页 |
| 1．2 方法 | 第116-117页 |
| 1．2．1 水解物的制备 | 第116页 |
| 1．2．2 氨基含量及水解度的测定 | 第116-117页 |
| 1．2．3 水解物肽的分子量分布分析方法 | 第117页 |
| 2 结果和讨论 | 第117-126页 |
| 2．1 几种蛋白酶对丝素的水解作用 | 第117-119页 |
| 2．1．1 纯化弹性蛋白酶对精练丝素和可溶性丝素水解能力的比较 | 第117-118页 |
| 2．1．2 酶水解进程曲线 | 第118-119页 |
| 2．2 Bacillus sp. EL31410的弹性蛋白酶水解丝素的条件确定 | 第119-124页 |
| 2．2．1 底物浓度对酶促反应的影响——动力学常数的测定 | 第119-122页 |
| 2．2．2 E／S对酶促反应的影响 | 第122-123页 |
| 2．2．3 温度对酶促反应的影响 | 第123-124页 |
| 2．2．4 pH对酶促反应的影响 | 第124页 |
| 2．3 高水解度丝素肽的相对分子量分布 | 第124-126页 |
| 3 小结 | 第126-128页 |
| 第八章 弹性蛋白酶的安全性实验 | 第128-131页 |
| 0 引言 | 第128页 |
| 1 材料和方法 | 第128-129页 |
| 1．1 实验材料 | 第128页 |
| 1．2 实验动物和检测条件 | 第128页 |
| 1．3 实验方法 | 第128-129页 |
| 2 结果与讨论 | 第129-130页 |
| 3 小结 | 第130-131页 |
| 结论与展望 | 第131-134页 |
| 参考文献 | 第134-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 附录 | 第148页 |
