超氧阴离子自由基检测与清除相关蛋白cpYFP、EC-SOD的发酵工艺研究
| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 自由基概论 | 第8-10页 |
| 1.1.1 人体中的自由基种类 | 第8-9页 |
| 1.1.2 自由基对人体的危害 | 第9-10页 |
| 1.2 自由基检测与清除研究现状 | 第10-12页 |
| 1.2.1 超氧阴离子自由基的检测 | 第10-11页 |
| 1.2.2 超氧阴离子自由基的清除 | 第11-12页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第12-13页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统的特点 | 第12-13页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表达载体 | 第13页 |
| 1.4 毕赤酵母的发酵 | 第13-16页 |
| 1.4.1 研究进展及优化策略 | 第13-15页 |
| 1.4.2 微生物的培养方式 | 第15页 |
| 1.4.3 补料方式 | 第15-16页 |
| 1.5 课题的研究意义与内容 | 第16-18页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第16页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 培养基 | 第19页 |
| 2.1.4 常用溶液配制 | 第19-22页 |
| 2.2 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 菌种活化 | 第23页 |
| 2.3.2 种子液培养 | 第23页 |
| 2.3.3 EC-SOD免疫印迹(WB)实验 | 第23-24页 |
| 2.3.4 EC-SOD摇瓶发酵条件优化 | 第24-25页 |
| 2.3.5 EC-SOD 5L罐发酵 | 第25页 |
| 2.3.6 cpYFP单因素实验 | 第25-26页 |
| 2.3.7 cpYFP的5L罐发酵 | 第26页 |
| 2.3.8 微滤与超滤 | 第26页 |
| 2.4 检测方法 | 第26-30页 |
| 2.4.1 EC-SOD酶活力测定 | 第26-27页 |
| 2.4.2 cpYFP的荧光测定 | 第27页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE电泳 | 第27-28页 |
| 2.4.4 银染 | 第28-29页 |
| 2.4.5 菌体浓度及发酵液糖度测定 | 第29页 |
| 2.4.6 超声波破碎条件 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-65页 |
| 3.1 EC-SOD免疫印迹实验结果 | 第30页 |
| 3.2 EC-SOD摇瓶水平优化实验结果 | 第30-53页 |
| 3.2.1 毕赤酵母生长曲线 | 第30-31页 |
| 3.2.2 EC-SOD培养基的选择 | 第31-32页 |
| 3.2.3 温度对EC-SOD酶活力影响 | 第32-33页 |
| 3.2.4 接种量对EC-SOD酶活力影响 | 第33-34页 |
| 3.2.5 pH对EC-SOD酶活力影响 | 第34页 |
| 3.2.6 甲醇诱导浓度对EC-SOD酶活力影响 | 第34-35页 |
| 3.2.7 诱导时间对EC-SOD酶活力影响 | 第35-36页 |
| 3.2.8 转速对EC-SOD酶活力影响 | 第36-37页 |
| 3.2.9 装液量对EC-SOD酶活力影响 | 第37-38页 |
| 3.2.10 碳源对EC-SOD酶活力影响 | 第38-40页 |
| 3.2.11 两种培养基胞内与胞外酶活力对比 | 第40-41页 |
| 3.2.12 EC-SOD培养基配方优化结果 | 第41-48页 |
| 3.2.13 EC-SOD正交试验结果 | 第48-53页 |
| 3.3 EC-SOD 5L发酵实验结果 | 第53-56页 |
| 3.4 cpYFP单因素实验结果 | 第56-61页 |
| 3.4.1 温度对cpYFP的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.2 pH对cpYFP的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.3 接种量对cpYFP的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.4 甲醇诱导浓度对cpYFP的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.5 不同培养基对cpYFP的影响 | 第60-61页 |
| 3.5 cpYFP的5L发酵实验结果 | 第61-62页 |
| 3.6 cpYFP发酵液的微滤、超滤 | 第62-65页 |
| 总结与展望 | 第65-68页 |
| 总结 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 个人简历 | 第74页 |
