| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 植物的抗冻机制 | 第12-14页 |
| 1.1.1 低温对植物的影响 | 第12-13页 |
| 1.1.2 植物激素和代谢物在植物抗冻机制中的作用 | 第13-14页 |
| 1.2 RD29A的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 RD29A的发现及其基因结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 RD29A的表达与调控 | 第15-16页 |
| 1.2.3 RD29A启动子的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 CBFs的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 CBFs的发现及其基因结构 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CBFs的蛋白结构 | 第18页 |
| 1.3.3 CBFs的表达与调控 | 第18-19页 |
| 1.4 雏菊的相关研究 | 第19页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 拟南芥RD29A启动子和CBF1的克隆及其表达载体的构建 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂及其配制 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 拟南芥培养条件 | 第23页 |
| 2.2.2 拟南芥基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.3 CBF1及RD29A启动子的高保真扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 质粒DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.6 CBF、RD29A启动子及质粒的双酶切 | 第25页 |
| 2.2.7 凝胶回收 | 第25-26页 |
| 2.2.8 连接 | 第26页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 2.2.10 农杆菌感受态细胞的转化 | 第26页 |
| 2.3 实验结果及讨论 | 第26-36页 |
| 2.3.1 拟南芥C24基因组DNA提取 | 第26页 |
| 2.3.2 CBF1及RD29A启动子的高保真扩增 | 第26-28页 |
| 2.3.3 质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.4 CBF1、RD29A启动子及质粒的双酶切 | 第28-29页 |
| 2.3.5 凝胶回收 | 第29页 |
| 2.3.6 阳性克隆PCR和酶切验证 | 第29-32页 |
| 2.3.7 表达载体转化农杆菌 | 第32-33页 |
| 2.3.8 序列分析 | 第33-36页 |
| 第三章 雏菊再生体系的构建及其遗传转化 | 第36-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 3.1.2 菌株 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂及其配制 | 第36页 |
| 3.1.4 主要培养基 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 培养条件 | 第37页 |
| 3.2.2 无菌苗的获得 | 第37页 |
| 3.2.3 雏菊再生体系的建立 | 第37-38页 |
| 3.2.4 转化方法和转化条件的研究 | 第38-39页 |
| 3.2.5 转基因植株的验证 | 第39-40页 |
| 3.3 实验结果及讨论 | 第40-51页 |
| 3.3.1 不同生长激素配比对雏菊不定芽诱导的影响 | 第40-42页 |
| 3.3.2 NAA浓度对雏菊不定芽生根的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.3 抑制LBA4404生长的最佳Cef浓度的确定 | 第43-44页 |
| 3.3.4 不同Kan浓度对雏菊不定芽诱导的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.5 不同Kan浓度对雏菊不定芽生根的影响 | 第45-47页 |
| 3.3.6 不同侵染条件对雏菊叶片遗传转化的影响 | 第47页 |
| 3.3.7 转基因苗的初步验证 | 第47-48页 |
| 3.3.8 转基因苗的表型及抗冻性 | 第48-51页 |
| 第四章 结论与展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 在学期间的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
