| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| 1.1 摩氏摩根菌和酯酶 | 第12-15页 |
| 1.1.1 摩氏摩根菌 | 第12-13页 |
| 1.1.2 酯酶 | 第13页 |
| 1.1.3 酯酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.1.4 酯酶的结构与催化机制 | 第14页 |
| 1.1.5 酯酶的工业应用 | 第14-15页 |
| 1.2 酯酶基因克隆研究现状 | 第15-18页 |
| 1.2.1 基因文库法 | 第16页 |
| 1.2.2 简并引物法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 分离纯化法 | 第17-18页 |
| 1.3 醋酶分离纯化研究现状 | 第18-20页 |
| 1.4 普瑞巴林简介 | 第20-23页 |
| 1.4.1 普瑞巴林的合成方法 | 第21-23页 |
| 1.5 本课题研究的目的、意义和研究内容 | 第23-24页 |
| 1.5.1 研究目的与意义 | 第23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-29页 |
| 第二章 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化研究 | 第29-48页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第30页 |
| 2.2.3 菌种及培养方法 | 第30页 |
| 2.2.4 酶活测定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 检测方法 | 第31页 |
| 2.2.6 蛋白质浓度测定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 粗酶液条件优化 | 第32-33页 |
| 2.2.8 硫酸铵分级沉淀 | 第33页 |
| 2.2.9 疏水相互作用层析 | 第33-34页 |
| 2.2.10 阴离子交换层析 | 第34页 |
| 2.2.11 羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析 | 第34-35页 |
| 2.2.12 分离纯化效果检测 | 第35-36页 |
| 2.2.13 电泳方法 | 第36-37页 |
| 2.2.14 蛋白质分子量的确定 | 第37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-46页 |
| 2.3.1 蛋白质标准曲线 | 第37页 |
| 2.3.2 M.morganii ZJB-09203细胞破碎 | 第37-39页 |
| 2.3.3 硫酸铵分级沉淀 | 第39-40页 |
| 2.3.4 疏水柱层析 | 第40-41页 |
| 2.3.5 DEAE离子交换层析过程的优化 | 第41-43页 |
| 2.3.6 DEAE阴离子交换层析最佳的洗脱条件 | 第43页 |
| 2.3.7 羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析 | 第43-44页 |
| 2.3.8 分离纯化检测结果及分析 | 第44页 |
| 2.3.9 SDS凝胶电泳和相对分子质量的测定 | 第44-46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-48页 |
| 第三章 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶酶学性质的研究 | 第48-64页 |
| 3.1 前言 | 第48-49页 |
| 3.2 材料和方法 | 第49-52页 |
| 3.2.1 主要实验仪器和实验试剂 | 第49页 |
| 3.2.2 菌种培养方法和酶活分析方法 | 第49-50页 |
| 3.2.3 蛋白质浓度测定 | 第50页 |
| 3.2.4 酯酶的酶学特性考察 | 第50-52页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第52-61页 |
| 3.3.1 pH对M. morganii ZJB-09203酯酶酶促反应的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.2 M. morganii ZJB-09203酯酶pH稳定性考察 | 第53页 |
| 3.3.3 温度对M.morganii ZJB-09203酯酶酶促反应的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.4 M. morganii ZJB-09203酯酶的热稳定性研究 | 第54-55页 |
| 3.3.5 金属离子对M.morganii ZJB-09203酯酶酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.6 有机溶剂对M. morganii ZJB-09203酯酶酶活力的影响 | 第56页 |
| 3.3.7 助溶剂和表面活性剂对M.morganii ZJB-09203酯酶酶活力的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.8 M. morganii ZJB-09203酯酶的底物特异性研究 | 第57-58页 |
| 3.3.9 M. morganii ZJB-09203酯酶催化动力学 | 第58-60页 |
| 3.3.10 M. morganii ZJB-09203酯酶催化CNDE反应分析 | 第60-61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 第四章 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的基因克隆研究 | 第64-79页 |
| 4.1 前言 | 第64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-72页 |
| 4.2.1 材料 | 第64-66页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第66-72页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第72-77页 |
| 4.3.1 M. morganii ZJB-09203蛋白质序列的分析 | 第72页 |
| 4.3.2 M. morganii ZJB-09203总DNA的提取 | 第72-73页 |
| 4.3.3 部分目的基因序列的PCR扩增 | 第73页 |
| 4.3.4 克隆载体pGEM~(?)-T的构建和阳性转化子的筛选 | 第73-74页 |
| 4.3.5 目的基因序列的测序分析 | 第74-75页 |
| 4.3.6 基因组酶切及序列测定 | 第75-77页 |
| 4.4 本章小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-79页 |
| 第五章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 5.1 结论 | 第79-80页 |
| 5.2 展望 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
