| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 赤霉病及亚洲镰刀菌研究概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 亚洲镰刀菌 | 第9页 |
| 1.1.2 赤霉病 | 第9-10页 |
| 1.1.3 镰刀菌毒素 | 第10页 |
| 1.1.4 赤霉病防治 | 第10页 |
| 1.2 RNAi技术 | 第10-13页 |
| 1.2.1 RNAi技术研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2.2 RNAi的作用机制 | 第11-12页 |
| 1.2.3 RNAi的特点 | 第12-13页 |
| 1.3 丝状真菌中的RNAi | 第13-14页 |
| 1.3.1 丝状真菌中的RNAi沉默现象 | 第13-14页 |
| 1.3.2 RNAi技术在丝状真菌中的应用 | 第14页 |
| 1.4 真菌RNAi研究路线 | 第14-16页 |
| 1.4.1 遗传转化方法 | 第14-15页 |
| 1.4.2 表达载体 | 第15-16页 |
| 1.5 亚洲镰刀菌关键基因 | 第16-18页 |
| 1.5.1 二型肌球蛋白合成酶基因(Myo 2) | 第16页 |
| 1.5.2 几丁质合成酶基因(Chs) | 第16-17页 |
| 1.5.3 葡聚糖合成酶基因(GLS) | 第17-18页 |
| 1.5.4 蛋白激酶C基因(PKC) | 第18页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 真菌菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 小麦材料 | 第19页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第19页 |
| 2.1.4 酶试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 试剂及培养基 | 第19-22页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.2 T4 DNA连接酶连接目的片段和载体 | 第23-24页 |
| 2.2.3 粘性末端片段的补平反应 | 第24页 |
| 2.2.4 Alealine Phosphatase(CIAP)的去磷酸反应 | 第24-25页 |
| 2.2.5 质粒DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.6 试剂盒回收DNA片段 | 第26页 |
| 2.2.7 感受态细胞制备及转化 | 第26-29页 |
| 2.2.8 原生质体的制备及转化 | 第29页 |
| 2.2.9 转化子PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.2.10 转化子Southern blot分析 | 第30-31页 |
| 2.2.11 转化子表型分析 | 第31页 |
| 2.2.12 转化子田间花期单花接种 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-50页 |
| 3.1 二型肌球蛋白(Myo 2)片段筛选及功能分析 | 第32-40页 |
| 3.1.1 基因序列脱靶分析 | 第32页 |
| 3.1.2 目的片段的扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.3 pDOR201-Myo2-BP入门载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.4 psxsh-RNAi-Myo2系列干扰表达载体构建 | 第34页 |
| 3.1.5 导入Myo 2片段RNAi载体菌株的筛选与鉴定 | 第34-36页 |
| 3.1.6 导入Myo 2片段RNAi载体菌株Southern分析 | 第36-37页 |
| 3.1.7 转入Myo 2片段的RNAi载体菌株表型分析 | 第37-38页 |
| 3.1.8 Myo 2基因片段RNAi阳性菌株致病力分析 | 第38-39页 |
| 3.1.9 亚洲镰刀菌Myo 2基因表达量分析 | 第39-40页 |
| 3.2 植物表达载体构建 | 第40-50页 |
| 3.2.1 小麦有效片段2次重复tRNA植物表达载体构建 | 第40-46页 |
| 3.2.2 基因枪载体linker替换 | 第46-48页 |
| 3.2.3 植物表达载体总结 | 第48-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 亚洲镰刀菌RNAi载体构建 | 第50页 |
| 4.2 亚洲镰刀菌Myo 2基因RNAi片段鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3 植物表达载体构建 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
