| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第9-10页 |
| 1.2 表观遗传学简介及相关进展 | 第10-11页 |
| 1.3 RNAM6A甲基化简介 | 第11-14页 |
| 1.4 RNAM6A甲基化研究进展 | 第14-18页 |
| 1.4.1 FTO去甲基化酶的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5 CRISPR-CAS9基因编辑技术 | 第18-19页 |
| 1.6 技术路线及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验菌株,载体,细胞系及组织样品 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂及仪器 | 第21-24页 |
| 2.1.3 实验分析软件及网站 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 细胞水平实验 | 第24-25页 |
| 2.2.2 细胞总RNA的提取 | 第25-27页 |
| 2.2.3 Me-RIP实验 | 第27-28页 |
| 2.2.4 DotBlot | 第28-29页 |
| 2.2.5 RNA的反转录 | 第29-30页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第30页 |
| 2.2.7 基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.8 WesternBlot实验 | 第31-34页 |
| 2.2.9 Cas9敲除载体的构建、转化和阳性克隆筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.10 pcDNA3.0载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.11 质粒的提取与纯化 | 第36-38页 |
| 第3章 FTO基因敲低和过表达细胞系的构建 | 第38-44页 |
| 3.1 引言 | 第38-39页 |
| 3.2 五种M6A相关的酶表达检测 | 第39页 |
| 3.3 CRISPR-CAS9-FTO敲低载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.4 PCDNA3.0过表达载体的构建及检测 | 第41-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 3.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 第4章 m6A去甲基化酶FTO下游基因鉴定 | 第44-51页 |
| 4.1 引言 | 第44页 |
| 4.2 FTO下游基因及下游基因位点的筛选及鉴定 | 第44-49页 |
| 4.3 讨论 | 第49-50页 |
| 4.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59页 |