| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第—章 前言 | 第14-22页 |
| 1.1 概述 | 第14页 |
| 1.2 孢子体自交不亲和与配子体自交不亲和 | 第14-15页 |
| 1.3 泛素/26s蛋白酶体途径(ubiquitin/26s proteasome pathway,UPP) | 第15-17页 |
| 1.3.1 泛素 | 第16页 |
| 1.3.2 泛素活化酶UBE1 | 第16页 |
| 1.3.3 泛素结合酶UBE2 | 第16-17页 |
| 1.3.4 泛素蛋白连接酶UBE3 | 第17页 |
| 1.4 泛素/26s蛋白酶体途径的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.5 泛素蛋白酶体途径与植物自交不亲和 | 第18-19页 |
| 1.6 泛素蛋白酶体途径与果树自交不亲和 | 第19-20页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 1.8 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 植株材料 | 第22页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第22-23页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 培养基及试剂配置 | 第23-25页 |
| 2.1.5 实验所用引物 | 第25-26页 |
| 2.2 实验仪器与器材 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-44页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.2 cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 2.3.3 UBE2A及UBE2I同源基因全长cDNA的克隆 | 第28-31页 |
| 2.3.3.1 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.3.2 目的片段的回收 | 第29-30页 |
| 2.3.3.3 目的片段的克隆与测序 | 第30-31页 |
| 2.3.4 DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.5 UBE2A和UBE2I同源基因全长DNA的扩增及内含子分析 | 第32-33页 |
| 2.3.6 UBE2A和UBE2I同源基因的生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.3.7 UBE2A和UBE2I同源基因的表达分析 | 第34-35页 |
| 2.3.8 UBE2A和UBE2I同源基因的亚细胞定位 | 第35-41页 |
| 2.3.8.1 P1300-GFP-UBE2A与P1300-GFP-UBE2I载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.3.8.2 农杆菌感受态的制备 | 第37-38页 |
| 2.3.8.3 农杆菌转化与鉴定 | 第38-40页 |
| 2.3.8.4 注射本氏烟草 | 第40-41页 |
| 2.3.9 F-box、UBE2A和UBE2I同源基因酵母双杂交载体的构建 | 第41-44页 |
| 2.3.9.1 酵母表达载体构建 | 第41页 |
| 2.3.9.2 制备酵母感受态细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.9.3 转化酵母感受态细胞 | 第42-43页 |
| 2.3.9.4 自激活检测 | 第43页 |
| 2.3.9.5 毒性检测 | 第43-44页 |
| 第三章 结果分析 | 第44-63页 |
| 3.1 RNA的提取 | 第44页 |
| 3.2 柠檬UBE2A和UBE2I同源基因ORF全长 | 第44-46页 |
| 3.3 DNA的提取 | 第46-47页 |
| 3.4 柠檬UBE2A和UBE2I同源基因DNA全长 | 第47-48页 |
| 3.5 UBE2A和UBE2I同源基因的生物信息学分析 | 第48-56页 |
| 3.6 UBE2A和UBE2I同源基因的时空表达分析 | 第56-59页 |
| 3.7 柠檬UBE2A和UBE2I同源基因的亚细胞定位 | 第59-61页 |
| 3.7.1 载体构建 | 第59页 |
| 3.7.2 亚细胞定位结果 | 第59-61页 |
| 3.8 酵母双杂交载体的构建 | 第61-63页 |
| 3.8.1 酵母表达载体的鉴定 | 第61页 |
| 3.8.2 自激活检测和毒性鉴定 | 第61-63页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第63-68页 |
| 4.1 讨论 | 第63-66页 |
| 4.1.1 柠檬UBE2A和UBE2I同源基因的ORF和DNA全长 | 第63页 |
| 4.1.2 柠檬UBE2A和UBE2I同源基因结构分析 | 第63-64页 |
| 4.1.3 UBE2A和UBE2I同源基因保守结构域 | 第64页 |
| 4.1.4 UBE2A和UBE2I同源基因的时空表达 | 第64-65页 |
| 4.1.5 UBE2A和UBE2I同源基因的亚细胞定位 | 第65-66页 |
| 4.2 结论 | 第66-68页 |
| 第五章 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 | 第77-80页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第80页 |
