| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 插图及附表清单 | 第13-15页 |
| 缩略语表 | 第15-17页 |
| 1 引言 | 第17-42页 |
| 1.1 卵母细胞成熟 | 第17-19页 |
| 1.1.1 卵子发生 | 第17页 |
| 1.1.2 牛卵母细胞的体外成熟 | 第17-18页 |
| 1.1.3 卵母细胞体外成熟的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2 CNP对家畜繁殖的作用机制 | 第19-21页 |
| 1.2.1 C-型钠肽 | 第19-20页 |
| 1.2.2 CNP与动物生殖 | 第20-21页 |
| 1.2.3 CNP作用机制 | 第21页 |
| 1.3 卵母细胞中和胚胎中的线粒体 | 第21-27页 |
| 1.3.1 卵母细胞和胚胎中线粒体的产生及分布 | 第22-23页 |
| 1.3.2 线粒体在卵母细胞中分布模式的研究 | 第23-24页 |
| 1.3.3 卵细胞和胚胎中线粒体与ATP的关系 | 第24页 |
| 1.3.4 卵母细胞和胚胎中线粒体与氧化还原代谢的关系 | 第24-26页 |
| 1.3.5 线粒体活性对卵母细胞发育成熟和胚胎发育的重要性 | 第26-27页 |
| 1.4 哺乳动物卵母细胞中的mtDNA | 第27-28页 |
| 1.4.1 卵母细胞中线粒体DNA拷贝数的研究 | 第28页 |
| 1.4.2 线粒体DNA拷贝数与ATP | 第28页 |
| 1.5 哺乳动物基因组印记的研究进展 | 第28-33页 |
| 1.5.1 基因组印记的发现 | 第29页 |
| 1.5.2 基因组印记的特点 | 第29-30页 |
| 1.5.2.1 父系和母系基因组DNA不同步复制 | 第29-30页 |
| 1.5.2.2 印记基因在染色体特定区域聚集 | 第30页 |
| 1.5.2.3 印记基因遗传印记具有组织特异性 | 第30页 |
| 1.5.2.4 印记基因转录和翻译方式不同 | 第30页 |
| 1.5.3 基因组印记的印记机制 | 第30-31页 |
| 1.5.4 印记基因的表达调控 | 第31页 |
| 1.5.5 基因组印记与胚胎发育的关系 | 第31-33页 |
| 1.6 早期胚胎细胞凋亡 | 第33-37页 |
| 1.6.1 胚胎生产与细胞凋亡 | 第33-34页 |
| 1.6.2 胚胎细胞的凋亡与胚胎发育 | 第34页 |
| 1.6.3 凋亡的途径 | 第34-36页 |
| 1.6.4 胚胎细胞凋亡的影响因素 | 第36-37页 |
| 1.6.4.1 精子质量对胚胎细胞凋亡的影响 | 第36页 |
| 1.6.4.2 卵母细胞质量对胚胎细胞凋亡的影响 | 第36-37页 |
| 1.6.4.3 培养环境对胚胎细胞凋亡的影响 | 第37页 |
| 1.7 影响胚胎发育的因素 | 第37-38页 |
| 1.8 本研究的目的、意义及主要研究内容 | 第38-42页 |
| 1.8.1 研究目的和意义 | 第38页 |
| 1.8.2 研究的主要研究内容及技术路线 | 第38-42页 |
| 1.8.2.1 研究内容 | 第38-39页 |
| 1.8.2.2 技术路线 | 第39-42页 |
| 2 C型钠肽处理对牛体外成熟卵母细胞线粒体分布的影响 | 第42-51页 |
| 2.1 材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 2.2.1 卵母细胞的采集 | 第44-45页 |
| 2.2.2 CNP对牛卵母细胞处理及体外成熟培养 | 第45页 |
| 2.2.3 牛卵母细胞的体外受精及体外培养 | 第45页 |
| 2.2.4 牛卵母细胞线粒体染色 | 第45-46页 |
| 2.2.5 卵母细胞核染色及囊胚计数 | 第46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 2.3.1 体外受精胚胎质量及囊胚计数 | 第46-47页 |
| 2.3.2 线粒体分布 | 第47-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-50页 |
| 2.5 结论 | 第50-51页 |
| 3 C型钠肽处理对牛体外成熟卵母细胞mtDNA的影响 | 第51-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第51页 |
| 3.2 实验步骤 | 第51-59页 |
| 3.2.1 卵母细胞的采集 | 第51-52页 |
| 3.2.2 C型钠肽预处理及卵母细胞的体外成熟 | 第52页 |
| 3.2.3 牛卵母细胞的体外受精及体外培养 | 第52页 |
| 3.2.4 线粒体DNA拷贝数检测 | 第52页 |
| 3.2.5 标准品的制备 | 第52-59页 |
| 3.2.5.1 组织基因组DNA的提取 | 第52页 |
| 3.2.5.2 目的基因的获得 | 第52-53页 |
| 3.2.5.3 连接质粒 | 第53-58页 |
| 3.2.5.4 卵母细胞DNA的提取 | 第58页 |
| 3.2.5.5 绝对荧光定量PCR检测mtDNA拷贝数 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-60页 |
| 3.3.1 体外受精胚胎质量及囊胚计数 | 第59页 |
| 3.3.2 卵母细胞的拷贝数检测 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60页 |
| 3.5 结论 | 第60-61页 |
| 4 C型钠肽处理对牛体外成熟卵母细胞ROS-GSH水平的影响 | 第61-69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-62页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1.1 主要试剂 | 第61页 |
| 4.1.1.2 主要仪器 | 第61页 |
| 4.1.1.3 主要溶液配制 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 卵母细胞的采集 | 第62页 |
| 4.2.2 C型钠肽预处理及卵母细胞的体外成熟 | 第62页 |
| 4.2.3 牛卵母细胞的体外受精及体外培养 | 第62页 |
| 4.2.4 卵母细胞核染色及囊胚计数 | 第62页 |
| 4.2.5 牛卵母细胞ROS-GSH水平检测 | 第62-64页 |
| 4.2.5.1 ROS水平检测 | 第62-63页 |
| 4.2.5.2 GSH水平检测 | 第63-64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-67页 |
| 4.3.1 体外受精胚胎质量及囊胚计数 | 第66-67页 |
| 4.3.2 C型钠肽处理对牛体外成熟卵母细胞ROS水平的影响 | 第67页 |
| 4.3.3 C型钠肽处理对牛体外成熟卵母细胞GSH含量的影响 | 第67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.5 结论 | 第68-69页 |
| 5 不同氧气浓度对牛体外受精胚胎细胞凋亡的影响 | 第69-80页 |
| 5.1 材料 | 第69-70页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第69页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第69-70页 |
| 5.1.3 主要溶液配制 | 第70页 |
| 5.2 实验方法 | 第70-74页 |
| 5.2.1 卵母细胞的采集 | 第70页 |
| 5.2.2 卵母细胞体外成熟 | 第70页 |
| 5.2.3 体外受精 | 第70页 |
| 5.2.4 凋亡检测 | 第70-71页 |
| 5.2.5 凋亡基因表达量的检测 | 第71-74页 |
| 5.3 结果与分析 | 第74-78页 |
| 5.3.1 不同浓度O_2对牛卵母细胞成熟的影响 | 第75页 |
| 5.3.2 Mcl-1在牛体外受精胚胎中的表达 | 第75-76页 |
| 5.3.3 Bad在牛体外受精胚胎中的表达 | 第76页 |
| 5.3.4 Bak在牛体外受精胚胎中的表达 | 第76-77页 |
| 5.3.5 Bik在牛体外受精胚胎中的表达 | 第77页 |
| 5.3.6 Caspase-3在牛体外受精胚胎中的表达 | 第77-78页 |
| 5.4 讨论 | 第78-79页 |
| 5.5 结论 | 第79-80页 |
| 6 印记基因在牛早期胚胎中的表达 | 第80-88页 |
| 6.1 实验材料及试剂 | 第80页 |
| 6.2 实验方法 | 第80-82页 |
| 6.2.1 卵母细胞的采集 | 第80页 |
| 6.2.2 卵母细胞的孤雌激活与重构胚的培养 | 第80-81页 |
| 6.2.3 体外受精及受精胚胎的收集 | 第81页 |
| 6.2.4 印记基因表达量的检测 | 第81-82页 |
| 6.3 结果与分析 | 第82-86页 |
| 6.3.1 总RNA提取与克隆测序 | 第82页 |
| 6.3.2 标准曲线结果 | 第82-83页 |
| 6.3.3 各基因荧光定量PCR结果 | 第83-86页 |
| 6.4 讨论 | 第86-87页 |
| 6.5 结论 | 第87-88页 |
| 7 全文总体结论及创新点 | 第88-89页 |
| 7.1 结论 | 第88页 |
| 7.2 创新点 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-107页 |
| 作者简介 | 第107页 |
