| 致谢 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| 1.1 DNA2的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1.1 酵母中DNA2的发现及其酶学研究 | 第14-17页 |
| 1.1.2 人类DNA2在冈崎片段成熟过程中的作用 | 第17-18页 |
| 1.1.3 人类DNA2在维持线粒体基因组稳定性中的作用 | 第18-19页 |
| 1.1.4 DNA2在维持核基因组稳定性中的作用 | 第19-21页 |
| 1.2 蛋白入核机制的研究 | 第21-25页 |
| 1.2.1 核孔复合体 | 第21-22页 |
| 1.2.2 入核信号 | 第22-24页 |
| 1.2.3 分子机制 | 第24-25页 |
| 1.3 泛素化 | 第25-28页 |
| 1.4 泛素化调控蛋白的稳定性与核定位 | 第28-29页 |
| 1.5 TATDN1的研究背景 | 第29-30页 |
| 本文的理论依据和研究意义 | 第30-32页 |
| 第二章 哺乳动物DNA2在细胞核和线粒体内的功能及调控 | 第32-84页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-44页 |
| 2.1.1 表达质粒的构建 | 第32-37页 |
| 2.1.2 蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 2.1.3 DNA2突变体的构建与表达 | 第38页 |
| 2.1.4 细胞组分分离实验 | 第38-39页 |
| 2.1.5 G4底物及G4切割分析 | 第39-40页 |
| 2.1.6 Polγ活性的分析 | 第40页 |
| 2.1.7 免疫共沉淀(Co-IP)和亲和沉淀分析 | 第40-42页 |
| 2.1.8 染色质免疫共沉淀(CHIP) | 第42页 |
| 2.1.9 免疫荧光分析 | 第42页 |
| 2.1.10 原位杂交(FISH)和共原位杂交(Co-FISH) | 第42-43页 |
| 2.1.11 免疫荧光原位杂交(IF-FISH) | 第43页 |
| 2.1.12 RNA干扰(siRNA) | 第43-44页 |
| 2.1.13 DNA2杂合敲除小鼠模型的构建 | 第44页 |
| 2.1.14 组织病理学 | 第44页 |
| 2.2 结果与分析 | 第44-78页 |
| 2.2.1 DNA2主要定位在线粒体内而非核内 | 第44-46页 |
| 2.2.2 DNA2与polγ相互作用并促进其DNA合成的效率 | 第46-47页 |
| 2.2.3 线粒体肌病病人样本中DNA2突变体的发现 | 第47-50页 |
| 2.2.4 DNA2突变体影响其核酸酶/解旋酶活性 | 第50-55页 |
| 2.2.5 DNA2+/-杂合敲除小鼠的构建与鉴定 | 第55-56页 |
| 2.2.6 DNA2缺失引起癌症的发生 | 第56-57页 |
| 2.2.7 DNA2+/-MEF细胞具有端粒缺失、姐妹染色体交换等表型 | 第57-59页 |
| 2.2.8 哺乳动物细胞中的DNA2在端粒上有分布 | 第59-62页 |
| 2.2.9 体外生化实验分析DNA2切除不同结构G-四联体的效率 | 第62-64页 |
| 2.2.10 G4稳定剂显著增加DNA2+/-MEF细胞中端粒缺失的概率 | 第64-65页 |
| 2.2.11 DNA2缺失引起端粒损伤以及染色体分离缺陷 | 第65-67页 |
| 2.2.12 DNA2+/-杂合敲除小鼠癌组织中端粒变短及DNA加倍 | 第67-69页 |
| 2.2.13 DNA2与E3连接酶TRAF6相互作用 | 第69-71页 |
| 2.2.14 体内及体外实验证明DNA2能被TRAF6泛素化 | 第71-73页 |
| 2.2.15 TRAF6能够稳定DNA2蛋白使其不被降解 | 第73-75页 |
| 2.2.16 TRAF6通过泛素化介导DNA2结合到染色质上 | 第75-76页 |
| 2.2.17 DSB介导DNA2入核进行DNA修复 | 第76-78页 |
| 2.3 讨论 | 第78-84页 |
| 第三章 TATDNl在斑马鱼眼发育过程中调控染色体分离及细胞周期进程 | 第84-98页 |
| 3.1 材料与方法 | 第84-88页 |
| 3.1.1 重组蛋白的表达与纯化及多克隆载体的制备 | 第84-85页 |
| 3.1.2 核酸酶活性和DNA分离分析 | 第85-86页 |
| 3.1.3 斑马鱼整体原位杂交(WISH) | 第86-87页 |
| 3.1.4 反义核酸技术和显微注射 | 第87页 |
| 3.1.5 Edu的显微注射及免疫荧光染色 | 第87页 |
| 3.1.6 流式细胞技术检测胚胎细胞的周期和细胞遗传学观察 | 第87-88页 |
| 3.2 结果与分析 | 第88-97页 |
| 3.2.1 重组zTATDN1及突变体蛋白的纯度以及抗体验证 | 第88-89页 |
| 3.2.2 斑马鱼TATDN1(zTATDN1)可以切割超螺旋质粒DNA | 第89-90页 |
| 3.2.3 斑马鱼TATDN1(zTATDN1)可以解离kDNA | 第90-91页 |
| 3.2.4 zTATDN1mRNA在斑马鱼胚胎不同发育阶段的分布 | 第91-92页 |
| 3.2.5 zTATDN1的缺失抑制了细胞周期的进程导致斑马鱼眼细胞多倍体的形成 | 第92-94页 |
| 3.2.6 zTATDN1缺失影响斑马鱼眼睛发育 | 第94-97页 |
| 3.3 讨论 | 第97-98页 |
| 总结与展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 作者简历 | 第114页 |
