| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第15-43页 |
| 1.1 脊椎动物脑的形成过程和基本结构 | 第15-18页 |
| 1.2 脊椎动物组织者的形成与胚胎神经诱导 | 第18-24页 |
| 1.2.1 组织者的形成的分子机制 | 第18-21页 |
| 1.2.2 脊椎动物神经诱导的分子机制 | 第21-24页 |
| 1.3 中枢神经系统前后模式形成的分子机制 | 第24-27页 |
| 1.3.1 Wnt信号途径 | 第25-26页 |
| 1.3.2 FGF信号途径 | 第26页 |
| 1.3.3 视黄酸(retinoic acid,RA) | 第26-27页 |
| 1.4 Spemann组织者的不同功能区域 | 第27-29页 |
| 1.4.1 头部组织者(Head organizer) | 第28页 |
| 1.4.2 躯干部组织者(Trunk organizer) | 第28-29页 |
| 1.5 索前中内胚层在中枢神经系统前后模式形成中的作用 | 第29-32页 |
| 1.5.1 PME形成与维持的分子机制 | 第30页 |
| 1.5.2 PME在前端神经系统发育中的作用 | 第30-31页 |
| 1.5.3 PME调控中枢神经前后模式形成的分子机制 | 第31-32页 |
| 1.6 PME细胞的运动方式及其调控机制 | 第32-36页 |
| 1.6.1 原肠胚期中内胚层细胞的运动 | 第32-34页 |
| 1.6.2 PME细胞的运动方式 | 第34-35页 |
| 1.6.3 调节PME细胞运动的分子机制 | 第35-36页 |
| 1.7 调控PME正确形成和空间定位的分子机制还不清楚 | 第36-37页 |
| 1.8 不同中枢神经功能区域在神经外胚层前后图式建立中的作用 | 第37-39页 |
| 1.8.1 前端神经边缘(anteriorneural border,ANB) | 第37页 |
| 1.8.2 峡部组织者(isthmic organizer,IsO) | 第37-38页 |
| 1.8.3 Zona limitans intrathalamica(ZLI) | 第38页 |
| 1.8.4 菱脑节4(rhomobere 4) | 第38-39页 |
| 1.9 转录因子Vsx1的特性及其在早期胚胎发育中的作用 | 第39-41页 |
| 1.9.1 脊椎动物中vsx1的结构特性及其时空表达模式 | 第39-40页 |
| 1.9.2 vsx1在脊椎动物发育过程中的功能研究 | 第40-41页 |
| 1.10 本研究的目的和意义 | 第41-43页 |
| 第二章 材料和方法 | 第43-64页 |
| 2.1 溶液的配置 | 第43-44页 |
| 2.2 斑马鱼的饲养以及胚胎的获得 | 第44-45页 |
| 2.3 斑马鱼胚胎去膜 | 第45页 |
| 2.4 反义吗啉环寡聚核苷酸(morpholino oligo,MO)的制备 | 第45-46页 |
| 2.5 Capped mRNA的制备 | 第46-52页 |
| 2.5.1 不同时期斑马鱼胚胎RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.5.2 RT-PCR | 第47-48页 |
| 2.5.3 目的基因的扩增及回收 | 第48-49页 |
| 2.5.4 双酶切反应 | 第49-50页 |
| 2.5.5 连接及转化 | 第50页 |
| 2.5.6 重组载体的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.5.7 重组载体的单酶切制备线性模板 | 第51页 |
| 2.5.8 Capped mRNA的制备与纯化 | 第51-52页 |
| 2.6 斑马鱼胚胎的显微注射 | 第52-53页 |
| 2.7 不同时期胚胎的观察与收集 | 第53页 |
| 2.8 整胚原位杂交 | 第53-59页 |
| 2.8.1 RNA探针的制备 | 第53-56页 |
| 2.8.2 斑马鱼的整胚原位杂交 | 第56-58页 |
| 2.8.3 差异标记共表达原位杂交 | 第58-59页 |
| 2.9 斑马鱼胚胎激光共聚焦观察 | 第59-60页 |
| 2.9.1 GAP43-YFP mRNA的制备 | 第59页 |
| 2.9.2 斑马鱼胚胎激光共聚焦(confocal)观察 | 第59-60页 |
| 2.10 实时荧光定量PCR | 第60-62页 |
| 2.10.1 不同时期、注射不同试剂的斑马鱼胚胎RNA的提取 | 第60页 |
| 2.10.2 斑马鱼总RNA中残留的基因组DNA的去除 | 第60页 |
| 2.10.3 逆转录合成cDNA | 第60-61页 |
| 2.10.4 实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR) | 第61-62页 |
| 2.11 GFP报告基因重组载体的构建 | 第62-64页 |
| 2.11.1 斑马鱼ntl近端启动子的扩增及重组质粒的构建 | 第62页 |
| 2.11.2 突变GFP报告基因载体的构建 | 第62-64页 |
| 第三章 实验结果 | 第64-93页 |
| 3.1 母源Vsx1参与调控PME形成和PME细胞的定向迁移 | 第64-71页 |
| 3.1.1 斑马鱼Vsx1对于PME的正确形成和空间定位是必需的 | 第64-66页 |
| 3.1.2 Vsx1调控PME细胞向前端的定向迁移运动 | 第66-69页 |
| 3.1.3 母源vsx1功能抑制胚胎中PME细胞形态发生了改变 | 第69-71页 |
| 3.2 母源Vsx1是斑马鱼胚胎前脑发育所必需的调控因子 | 第71-76页 |
| 3.2.1 母源vsx1影响斑马鱼胚胎神经系统早期发育 | 第71-73页 |
| 3.2.2 母源Vsx1特异性调控斑马鱼胚胎前脑的形成和空间定位 | 第73-76页 |
| 3.3 母源Vsx1功能抑制胚胎中PME形成和定位的缺陷导致了前脑的畸形发育和定位 | 第76-79页 |
| 3.4 母源Vsx1直接抑制ntl在胚胎发育早期的异位表达 | 第79-89页 |
| 3.4.1 vsx1调控ntl在原肠早期的表达 | 第80-82页 |
| 3.4.2 Vsx1在体内与ntl启动子结合的ChIP分析 | 第82-84页 |
| 3.4.3 Vsx1在ntl启动子上结合位点的确定 | 第84-86页 |
| 3.4.4 母源Vsx1不影响ntl上游Wnt和FGF因子的表达 | 第86-89页 |
| 3.5 斑马鱼Vsx1通过抑制ntl的异位表达在PME形成和前脑发育中起关键调控作用 | 第89-93页 |
| 3.5.1 共注射ntl MO能够恢复PME的形成和PME细胞的定向迁移运动 | 第90页 |
| 3.5.2 共注射ntl MO可以拯救母源Vsx1功能抑制胚胎中的前脑发育缺陷 | 第90-91页 |
| 3.5.3 斑马鱼中广泛表达ntl mRNA会造成前端发育缺陷 | 第91-92页 |
| 3.5.4 干扰Wnt11的功能不能有效地拯救Vsx1功能抑制胚胎中PME细胞的定向迁移运动 | 第92-93页 |
| 第四章 总结,讨论及进一步研究的设想 | 第93-99页 |
| 4.1 本研究的主要结果和结论 | 第93-94页 |
| 4.2 讨论 | 第94-97页 |
| 4.2.1 防止bra/nt1错误表达可能是脊椎动物中PME形成和前脑图式形成的一种保守调控机制 | 第94-95页 |
| 4.2.2 在Ntl错误表达胚胎中可能因细胞粘附被干扰而阻断了预定PME细胞的迁移运动 | 第95-96页 |
| 4.2.3 Nodal和FGF信号通路可能通过抑制母源Vsx1的作用而启动nt | 第96页 |
| 4.2.4 Vsx1结合位点的序列和结构特点 | 第96-97页 |
| 4.3 进一步的研究的设想 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-117页 |
| 作者简历 | 第117页 |
