| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第6-9页 |
| 文献综述 | 第9-20页 |
| 1 植物免疫机制研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1 植物先天免疫反应 | 第9-10页 |
| 1.2 植物系统获得性抗性 | 第10-11页 |
| 2 水稻与稻温病菌互作研究进展 | 第11-16页 |
| 2.1 稻瘟病简介 | 第11-13页 |
| 2.2 稻瘟病菌的侵染机制 | 第13页 |
| 2.3 水稻与稻瘟病互作机制 | 第13-16页 |
| 3 miRNA对植物免疫的调控作用 | 第16-19页 |
| 3.1 miRNA的生物起源及作用机理 | 第16-17页 |
| 3.2 miRNA对植物免疫的调控作用 | 第17页 |
| 3.3 miRNA调控水稻对稻瘟病抗性的研究 | 第17页 |
| 3.4 miR169及其靶基因的研究进展 | 第17-19页 |
| 4 论文选题依据以及研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 实验材料与方法 | 第20-37页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 水稻材料 | 第20页 |
| 1.2 烟草材料 | 第20页 |
| 1.3 稻瘟病菌材料 | 第20页 |
| 1.4 实验中所需的质粒、大肠杆菌和农杆菌菌株 | 第20页 |
| 1.5 常用的分子生物学酶和试剂 | 第20-21页 |
| 1.6 常用抗生素与培养基 | 第21页 |
| 1.7 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-37页 |
| 2.1 miR169a过表达载体构建 | 第22页 |
| 2.2 人工模拟靶标过表达载体构建 | 第22-25页 |
| 2.2.1 设计人工模拟靶标 | 第22页 |
| 2.2.2 设计引物进行PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.3 目的片段回收 | 第23页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒提取 | 第23页 |
| 2.2.5 酶切目的片段和载体 | 第23页 |
| 2.2.6 连接 | 第23页 |
| 2.2.7 感受态制备及转化 | 第23-24页 |
| 2.2.8 菌液PCR检测 | 第24-25页 |
| 2.2.9 转化农杆菌 | 第25页 |
| 2.2.10 农杆菌菌液PCR检测 | 第25页 |
| 2.3 靶基因荧光报告基因系统的构建 | 第25-26页 |
| 2.4 水稻遗传转化 | 第26-28页 |
| 2.4.1 各种培养基的配制 | 第26-27页 |
| 2.4.2 诱导愈伤组织 | 第27页 |
| 2.4.3 农杆菌侵染水稻愈伤组织 | 第27页 |
| 2.4.4 筛选与分化 | 第27页 |
| 2.4.5 生根 | 第27-28页 |
| 2.5 筛选鉴定阳性转基因苗 | 第28-31页 |
| 2.5.1 潮梅素初筛 | 第28页 |
| 2.5.2 通过PCR鉴定阳性转基因苗 | 第28页 |
| 2.5.3 水稻总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.5.4 去除基因组DNA | 第28-29页 |
| 2.5.5 miRNAs反转录 | 第29页 |
| 2.5.6 qRT-PCR鉴定miRNAs的表达量 | 第29-30页 |
| 2.5.7 RNA反转录并检测其靶基因的表达量 | 第30-31页 |
| 2.5.8 统计分析 | 第31页 |
| 2.6 验证miRNA对其靶基因在蛋白水平的抑制作用 | 第31-34页 |
| 2.6.1 烟草瞬时共表达 | 第31-32页 |
| 2.6.2 通过Western blot检测YFP蛋白水平 | 第32-34页 |
| 2.7 水稻稻瘟病抗性鉴定 | 第34-37页 |
| 2.7.1 水稻材料培养 | 第34页 |
| 2.7.2 稻瘟病菌培养 | 第34页 |
| 2.7.3 水稻接种稻瘟病菌 | 第34-35页 |
| 2.7.4 水稻对稻瘟病抗性的分级评价 | 第35页 |
| 2.7.5 qPCR检测稻瘟病菌的生物量 | 第35-36页 |
| 2.7.6 水稻叶片DAB染色 | 第36页 |
| 2.7.7 水稻叶片台盼蓝染色 | 第36-37页 |
| 实验结果 | 第37-53页 |
| 1 在水稻抗病材料和感病材料中,miR169家族不同亚型的累积量表现出不同的变化趋势 | 第37-38页 |
| 2 过表达miR169a增强了水稻对稻瘟病的抗性 | 第38-42页 |
| 3 过表达miR169a削弱了水稻的防御反应 | 第42-44页 |
| 4 miR169a在转录后和翻译水平负调控靶基因的表达 | 第44-49页 |
| 5 过表达miR169a的模拟靶标可以增强水稻对稻瘟病菌的抗性 | 第49-51页 |
| 6 在水稻抗病和感病材料中，miR169的靶基因受稻瘟病诱导表现出不同的表达模式 | 第51-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 附表 | 第67-70页 |
| 附表一 miR169靶基因信息 | 第67页 |
| 附表二 基因克隆引物 | 第67-68页 |
| 附表三 防御相关基因qRT-PCR引物 | 第68页 |
| 附表四 miRNA累积量检测引物 | 第68-69页 |
| 附表五 靶基因qRT-PCR引物 | 第69-70页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第70页 |
