| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩写表 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 p53蛋白的功能简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 p53主要作为转录因子发挥抑癌功能 | 第12-13页 |
| 1.1.2 p53功能失活是癌症发生的主要原因之一 | 第13-14页 |
| 1.2 PA28γ基因的功能简介 | 第14-18页 |
| 1.2.1 PA28γ是一个蛋白酶体激活因子 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PA28γ在细胞增殖、凋亡和癌症发生等过程中都发挥重要功能 | 第16-18页 |
| 1.3 本论文研究思路和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-36页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 细胞株和菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 载体和工具酶 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.4 抗体 | 第19-20页 |
| 2.2 质粒构建 | 第20-22页 |
| 2.2.1 PA28γ基因表达质粒的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.2 构建启动子质粒和启动子缺失质粒 | 第21页 |
| 2.2.3 构建p53应答元件质粒 | 第21-22页 |
| 2.3 生物信息学分析启动子 | 第22页 |
| 2.4 细胞培养 | 第22-24页 |
| 2.4.1 细胞解冻 | 第22-23页 |
| 2.4.2 细胞传代 | 第23页 |
| 2.4.3 细胞冻存 | 第23页 |
| 2.4.4 细胞转染 | 第23-24页 |
| 2.5 RLM-RACE(RNA酶介导的cDNA末端快速克隆)分析 | 第24-27页 |
| 2.6 蛋白质印迹(Western blotting) | 第27-28页 |
| 2.6.1 提取细胞总蛋白(10cm 皿) | 第27页 |
| 2.6.2 Western-blotting | 第27-28页 |
| 2.7 荧光素酶分析 | 第28-29页 |
| 2.8 构建p53shRNA和controlshRNA的稳定细胞系 | 第29-30页 |
| 2.9 染色质免疫共沉淀 | 第30-33页 |
| 2.10 His蛋白的诱导表达和纯化 | 第33-34页 |
| 2.10.1 His蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| 2.10.2 His蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 2.11 生物素亲和沉淀分析 | 第34-35页 |
| 2.12 统计学分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-46页 |
| 3.1 确定PA28γ基因的转录起始位点 | 第36-37页 |
| 3.2 确定PA28γ基因的基本启动子 | 第37-38页 |
| 3.3 P53与PA28γ基因的启动子结合 | 第38-41页 |
| 3.4 p53促进PA28γ基因的转录 | 第41-43页 |
| 3.5 p53诱导的PA28γ基因转录能够被PA28γ自身所抑制 | 第43-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
