| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 细胞凋亡概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 细胞凋亡及其意义 | 第12页 |
| 1.1.2 细胞凋亡的特征 | 第12页 |
| 1.1.3 引起细胞凋亡的因子 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞凋亡信号通路 | 第13-14页 |
| 1.2.1 Caspase依赖性细胞凋亡 | 第13-14页 |
| 1.2.2 Caspase非依赖性细胞凋亡 | 第14页 |
| 1.3 CASPASE蛋白酶家族 | 第14-15页 |
| 1.4 细胞色素C | 第15页 |
| 1.5 CED4,Apaf-1和Dark以及凋亡体的组装 | 第15-19页 |
| 1.5.1 CED4,Apaf-1,Dark | 第16-18页 |
| 1.5.2 凋亡体的结构与组装 | 第18-19页 |
| 1.6 抑凋亡蛋白 | 第19-20页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 实验材料和方法 | 第21-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 动物及细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 其它主要溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 实验操作以及方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 斜纹夜蛾虫体RNA的提取以及逆转录 | 第23-24页 |
| 2.2.2 目的基因PCR扩增以及重组载体构建 | 第24-29页 |
| 2.2.3 转化以及蓝白斑筛选 | 第29页 |
| 2.2.4 质粒提取以及PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.2.5 多克隆抗体的制备,纯化以及保存 | 第30-31页 |
| 2.2.6 免疫荧光检测Apaf-1蛋白在斜纹夜蛾细胞中的定位 | 第31-32页 |
| 2.2.7 转染 | 第32页 |
| 2.2.8 细胞质蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.2.9 蛋白质免疫共沉淀 | 第32-33页 |
| 2.2.10 Pull-down体外结合实验 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-49页 |
| 3.1 斜纹夜蛾细胞Spli Apaf-1多克隆抗体的制备、纯化以及检测 | 第34-39页 |
| 3.1.1 斜纹夜蛾总RNA的提取以及电泳检测 | 第34页 |
| 3.1.2 Apaf-1特异性抗原片段的选取及其原核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.3 斜纹夜蛾Apaf-1目的基因序列测定 | 第35-36页 |
| 3.1.4 重组蛋白表达及纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.5 多克隆抗体的制备、检测以及纯化 | 第37-39页 |
| 3.2 Apaf-1蛋白在斜纹夜蛾细胞中的定位 | 第39页 |
| 3.3 斜纹夜蛾Apaf-1蛋白的外源表达 | 第39-44页 |
| 3.3.1 Apaf-1基因ORF全长的克隆 | 第39-40页 |
| 3.3.2 Apaf-1原核表达尝试 | 第40-44页 |
| 3.4 斜纹夜蛾外源Apaf-1蛋白的胞内定位 | 第44-45页 |
| 3.5 斜纹夜蛾线粒体凋亡通路中Apaf-1蛋白与Cyto-C相互作用 | 第45-49页 |
| 3.5.1 Apaf-1蛋白与Cyto-C蛋白共转染斜纹夜蛾细胞 | 第45-46页 |
| 3.5.2 斜纹夜蛾Apaf-1蛋白与Cyto-C蛋白免疫共沉淀 | 第46-47页 |
| 3.5.3 Pull-Down检测外源Cyto-C蛋白与斜纹夜蛾胞内Apaf-1蛋白的相互作用 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
