| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 生物固氮概述 | 第11页 |
| 1.2 结瘤素概述 | 第11-12页 |
| 1.3 根瘤形成的过程及分类 | 第12-13页 |
| 1.3.1 根瘤的形成过程 | 第12页 |
| 1.3.2 根瘤的分类 | 第12-13页 |
| 1.4 结瘤素的分类 | 第13-15页 |
| 1.4.1 参与早期结瘤过程的结瘤素 | 第13-14页 |
| 1.4.2 参与结瘤过程晚期的结瘤素 | 第14-15页 |
| 1.5 豆科植物结瘤素基因的功能 | 第15-17页 |
| 1.6 非豆科植物结瘤素基因的功能 | 第17-18页 |
| 1.7 研究材料介绍 | 第18-19页 |
| 第二章 引言 | 第19-21页 |
| 2.1 研究背景 | 第19页 |
| 2.2 研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2.3 研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第三章 CpNOD基因的克隆与分子特性 | 第21-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 3.1.1 蜡梅花cDNA文库 | 第21页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第21页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第21页 |
| 3.1.5 常用溶液配方 | 第21-22页 |
| 3.1.6 基本培养基配方 | 第22页 |
| 3.2 试验方法 | 第22-34页 |
| 3.2.1 EST序列特征分析 | 第22-23页 |
| 3.2.2 蜡梅基因组DNA提取(CTAB(?) | 第23页 |
| 3.2.3 蜡梅DNA初提物纯化 | 第23-24页 |
| 3.2.4 蜡梅RNA提取 | 第24-25页 |
| 3.2.5 蜡梅cDNA一链的合成 | 第25页 |
| 3.2.6 利用hiTAIL-PCR扩增CpENOD基因序列 | 第25-29页 |
| 3.2.7 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第29页 |
| 3.2.8 克隆子的筛选和检测 | 第29-30页 |
| 3.2.9 蜡梅cDNA RACE模板合成(SMARTer~(TM) RACE cDNA Amplification) | 第30-31页 |
| 3.2.10 利用5'RACE克隆CpNOD基因5'端cDNA序列 | 第31-34页 |
| 3.2.11 CpNOD基因克隆 | 第34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-41页 |
| 3.3.1 腊梅DNA的提取纯化 | 第34页 |
| 3.3.2 CpNOD的cDNA的全长序列获得 | 第34-35页 |
| 3.3.3 CpNOD cDNA的序列特征 | 第35-36页 |
| 3.3.4 CpNOD基因的Blast分析和的蛋白同源性分析 | 第36-37页 |
| 3.3.5 CpNOD蛋白的信号肽分析 | 第37-38页 |
| 3.3.6 CpNOD编码蛋白的二级结构预测 | 第38-39页 |
| 3.3.7 疏水性分析 | 第39-40页 |
| 3.3.8 蛋白质磷酸化位点预测 | 第40-41页 |
| 3.3.9 蛋白质三维结构预测 | 第41页 |
| 3.4 小结 | 第41-43页 |
| 第四章 植物表达载体的构建以及烟草遗传转化体系建立 | 第43-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第43页 |
| 4.1.2 菌株与载体 | 第43页 |
| 4.1.3 主要仪器及化学试剂 | 第43页 |
| 4.1.4 常用溶液配方 | 第43-45页 |
| 4.2 试验方法 | 第45-49页 |
| 4.2.1 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第45-46页 |
| 4.2.2 农杆菌质粒DNA提取 | 第46-47页 |
| 4.2.3 目的DNA片段胶回收及大肠杆菌转化 | 第47页 |
| 4.2.4 植物表达载体pCAMBIA2301-CpNOD的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.5 农杆菌感受态制备和农杆菌转化 | 第48-49页 |
| 4.3 目的基因导入烟草及转化植株的获得 | 第49-50页 |
| 4.3.1 培养条件 | 第49页 |
| 4.3.2 烟草的转化—农杆菌介导的叶盘法 | 第49-50页 |
| 4.4 检测转基因烟草 | 第50-51页 |
| 4.4.1 卡那霉素(Km)抗性生根检测 | 第50页 |
| 4.4.2 GUS检测 | 第50页 |
| 4.4.3 转基因烟草植株PCR检测 | 第50-51页 |
| 4.4.4 移栽转基因植株 | 第51页 |
| 4.5 结果与分析 | 第51-54页 |
| 4.5.1 植物表达载体的构建 | 第51页 |
| 4.5.2 转基因烟草的获得 | 第51-53页 |
| 4.5.3 转基因烟草GUS检测 | 第53页 |
| 4.5.4 转基因烟草PCR检测 | 第53-54页 |
| 4.6 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 CpNOD基因表达的转录水平分析 | 第55-65页 |
| 5.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.1.1 植物材料及生长条件 | 第55页 |
| 5.1.2 主要试剂和设备 | 第55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 5.2.1 总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第55页 |
| 5.2.2 CpNOD基因在蜡梅花不同组织及不同时期表达的荧光定量分析 | 第55-58页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第58-65页 |
| 5.3.1 总RNA提取 | 第58页 |
| 5.3.2 引物扩增特异性检测 | 第58-59页 |
| 5.3.3 熔解曲线分析 | 第59-60页 |
| 5.3.4 标准曲线分析 | 第60-62页 |
| 5.3.5 蜡梅CpNOD基因在蜡梅花朵不同时期及不同组织中的荧光定量分析 | 第62-65页 |
| 总结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 缩略词表 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 发表论文与参加的研究课题 | 第75页 |
