| 致谢 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第13-19页 |
| 1 文献综述 | 第19-38页 |
| 1.1 抗草甘膦基因植物的研究及其应用进展 | 第20-23页 |
| 1.1.1 草甘膦及其在农业中的应用 | 第20-21页 |
| 1.1.2 草甘膦的性质及其作用机理 | 第21-23页 |
| 1.2 EPSPS的研究及其应用进展 | 第23-27页 |
| 1.2.1 草甘膦作用靶酶--EPSPS编码基因的发现及确定 | 第23页 |
| 1.2.2 EPSPS的分类及其在植物细胞中的定位 | 第23-24页 |
| 1.2.3 EPSPS的研究进展 | 第24-27页 |
| 1.3 作物抗草甘膦机理 | 第27-29页 |
| 1.4 转EPSPS抗草甘膦玉米的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.5 转基因玉米的安全性 | 第30-32页 |
| 1.5.1 转基因玉米的食用安全 | 第30-31页 |
| 1.5.2 转基因玉米的生物安全 | 第31页 |
| 1.5.3 目前解决转基因植物安全性问题的手段 | 第31-32页 |
| 1.6 烟嘧磺隆 | 第32-34页 |
| 1.6.1 烟嘧磺隆作用机理 | 第33页 |
| 1.6.2 玉米抗烟嘧磺隆的机理 | 第33-34页 |
| 1.6.3 玉米烟嘧磺隆解毒酶CYP81A9基因 | 第34页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 1.8 技术路线 | 第36-38页 |
| 1.8.1 抗草甘膦转基因玉米的培育 | 第36-37页 |
| 1.8.2 玉米安全转基因控制技术的研究 | 第37-38页 |
| 2 材料和方法 | 第38-45页 |
| 2.1 材料 | 第38页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 2.1.2 菌株和质粒载体 | 第38页 |
| 2.1.3 主要工具酶 | 第38页 |
| 2.1.4 常用试剂、核酸、蛋白分子质量及试剂盒 | 第38页 |
| 2.1.5 各种培养基的配置 | 第38页 |
| 2.1.6 常用生化试剂和仪器 | 第38页 |
| 2.2 论文中用到的分子生物学实验方法 | 第38-43页 |
| 2.2.1 基因组DNA提取 | 第38-39页 |
| 2.2.2 PCR技术 | 第39-40页 |
| 2.2.3 凝胶回收 | 第40页 |
| 2.2.4 高保真酶扩增产物加A反应 | 第40页 |
| 2.2.5 连接反应 | 第40页 |
| 2.2.6 质粒微量提取 | 第40-41页 |
| 2.2.7 酶切反应 | 第41页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第41页 |
| 2.2.9 农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第41页 |
| 2.2.10 Western blot | 第41-42页 |
| 2.2.11 Southern blot | 第42页 |
| 2.2.12 总RNA提取、纯化和cDNA第一链的合成 | 第42页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第42-43页 |
| 2.2.14 Tail-PCR基因定位 | 第43页 |
| 2.3 本论文用到的玉米转基因方法 | 第43-45页 |
| 2.3.1 玉米幼胚的准备 | 第43-44页 |
| 2.3.2 农杆菌的准备 | 第44页 |
| 2.3.3 玉米幼胚与农杆菌的共培养 | 第44页 |
| 2.3.4 愈伤的诱导和筛选 | 第44页 |
| 2.3.5 转化株系的再生与培养 | 第44-45页 |
| 3 转基因抗草甘膦玉米的获得和抗草甘膦性能的测定 | 第45-64页 |
| 3.1 方法 | 第45-51页 |
| 3.1.1 玉米转化表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.1.2 抗草甘膦转基因玉米的培育 | 第47页 |
| 3.1.3 转基因玉米的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.1.4 转基因玉米抗草甘膦性能测定 | 第49-50页 |
| 3.1.5 转基因玉米农艺性状分析 | 第50-51页 |
| 3.2 结果与分析 | 第51-61页 |
| 3.2.1 转基因抗草甘膦载体的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.2 转基因抗草甘膦玉米的获得 | 第52-53页 |
| 3.2.3 抗草甘膦基因与玉米基因组的整合 | 第53-54页 |
| 3.2.4 抗草甘膦基因在转基因玉米叶片中的表达分析 | 第54-55页 |
| 3.2.5 转基因玉米抗草甘膦能力分析 | 第55-58页 |
| 3.2.6 抗草甘膦基因在转基因玉米中的拷贝数 | 第58-59页 |
| 3.2.7 抗草甘膦基因在玉米基因组中的定位分析 | 第59-60页 |
| 3.2.8 转基因玉米农艺性状分析 | 第60-61页 |
| 3.3 讨论 | 第61-64页 |
| 4 玉米安全转基因控制技术 | 第64-82页 |
| 4.1 方法 | 第64-70页 |
| 4.1.1 基因克隆与分析 | 第64-65页 |
| 4.1.2 玉米转化表达载体的构建 | 第65-67页 |
| 4.1.3 农杆菌介导转基因玉米的培育 | 第67页 |
| 4.1.4 转基因玉米的鉴定 | 第67-68页 |
| 4.1.5 转基因玉米对烟嘧磺隆以及抗草甘膦敏感性性能测定 | 第68-69页 |
| 4.1.6 转基因玉米农艺性状分析 | 第69-70页 |
| 4.2 结果与分析 | 第70-79页 |
| 4.2.1 CYP81A9基因片段S1和S2的克隆与鉴定 | 第70页 |
| 4.2.2 转化载体的鉴定 | 第70-72页 |
| 4.2.3 转基因玉米的获得 | 第72页 |
| 4.2.4 外源基因与玉米基因组的整合 | 第72页 |
| 4.2.5 外源基因与植物基因组整合的Southern印迹分析 | 第72-75页 |
| 4.2.6 抗草甘膦基因在转基因玉米叶片中的表达分析 | 第75-76页 |
| 4.2.7 转基因株系沉默效率验证 | 第76-77页 |
| 4.2.8 转基因玉米对烟嘧磺隆及草甘膦敏感性分析 | 第77-78页 |
| 4.2.9 转基因玉米农艺性状分析 | 第78-79页 |
| 4.3 讨论 | 第79-82页 |
| 5 全文总结 | 第82-85页 |
| 5.1 总讨论 | 第82-83页 |
| 5.1.1 抗草甘膦转基因玉米的培育 | 第82页 |
| 5.1.2 玉米安全转基因控制技术 | 第82-83页 |
| 5.2 创新之处 | 第83页 |
| 5.3 下一步的研究 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 附录A 各种培养基配方 | 第94-99页 |
| 附录B 主要生化试剂和仪器 | 第99页 |
