| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-18页 |
| 1.1 淀粉酶 | 第8页 |
| 1.2 脱支酶 | 第8页 |
| 1.3 普鲁兰酶 | 第8-15页 |
| 1.3.1 普鲁兰酶简介 | 第8-9页 |
| 1.3.2 普鲁兰酶的分类 | 第9页 |
| 1.3.3 普鲁兰酶的来源 | 第9-10页 |
| 1.3.4 普鲁兰酶的改造 | 第10-11页 |
| 1.3.5 普鲁兰酶的结构及其作用机制 | 第11-15页 |
| 1.4 克雷伯氏菌宿主菌 | 第15页 |
| 1.5 大肠杆菌pET表达系统 | 第15-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-30页 |
| 3.1 材料 | 第19-21页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第19页 |
| 3.1.2 试剂与药品 | 第19页 |
| 3.1.3 试剂的配制 | 第19-21页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第21页 |
| 3.1.5 培养基 | 第21页 |
| 3.2 实验流程 | 第21-22页 |
| 3.2.1 普鲁兰酶基因的克隆 | 第21-22页 |
| 3.2.2 普鲁兰酶在大肠杆菌中的表达 | 第22页 |
| 3.3 实验方法 | 第22-30页 |
| 3.3.1 基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 3.3.2 普鲁兰酶基因的克隆 | 第22-23页 |
| 3.3.3 重组载体的构建 | 第23-24页 |
| 3.3.4 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态及其转化 | 第24-25页 |
| 3.3.5 大肠杆菌阳性转化子的筛选 | 第25页 |
| 3.3.6 大肠杆菌阳性转化子的大批量诱导表达 | 第25-26页 |
| 3.3.7 表达产物纯化 | 第26-27页 |
| 3.3.8 蛋白质含量测定(考马斯亮蓝法) | 第27页 |
| 3.3.9 重组普鲁兰酶酶学性质分析 | 第27-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-37页 |
| 4.1 普鲁兰酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| 4.1.1 PCR扩增pul(A)基因 | 第30页 |
| 4.1.2 pMD-19-pul(A)重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 4.2 pET-21a-pul(A)重组载体的构建 | 第31-32页 |
| 4.3 表达产物的SDS-PAGE分析及纯化 | 第32-33页 |
| 4.4 纯酶酶学性质分析 | 第33-37页 |
| 4.4.1 最适pH | 第33-34页 |
| 4.4.2 最适温度 | 第34页 |
| 4.4.3 pH稳定性 | 第34-35页 |
| 4.4.4 温度稳定性 | 第35页 |
| 4.4.5 不同化学试剂对普鲁兰酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 4.4.6 酶促动力学 | 第36-37页 |
| 5 结论与讨论 | 第37-39页 |
| 5.1 结论 | 第37页 |
| 5.2 讨论 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| ABSTRACT | 第44-45页 |
| 附录1 | 第46-53页 |
