| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 磷在小麦生长发育中的作用和参与磷胁迫相关基因的研究 | 第11-17页 |
| 1.1.1 磷肥在农业中的地位以及磷矿资源的危机 | 第11-12页 |
| 1.1.2 植物对低磷胁迫的应答机制 | 第12-16页 |
| 1.1.2.1 缺磷时植物根系的变化 | 第12-14页 |
| 1.1.2.2 磷胁迫对植物内部生理机制的影响 | 第14-15页 |
| 1.1.2.3 参与磷胁迫响应基因的研究 | 第15-16页 |
| 1.1.3 TaSNX1基因相关研究 | 第16-17页 |
| 1.2 脂肪酸氧化酶对小麦品质的影响和育种中的利用 | 第17-18页 |
| 1.2.1 脂肪酸氧化酶(LOX)对小麦面粉品质的影响 | 第17页 |
| 1.2.2 脂肪氧化酶检测方法 | 第17-18页 |
| 1.3 植物的转基因检测技术 | 第18-22页 |
| 1.3.1 基于蛋白水平上的检测方法 | 第19-20页 |
| 1.3.1.1 酶联免疫吸附 | 第19页 |
| 1.3.1.2 蛋白质印迹法 | 第19-20页 |
| 1.3.1.3 免疫试纸条法 | 第20页 |
| 1.3.2 基于核酸水平的检测方法 | 第20-22页 |
| 1.3.2.1 分子杂交技术 | 第20页 |
| 1.3.2.2 PCR检测方法 | 第20-21页 |
| 1.3.2.3 基因芯片技术 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的意义和技术路线 | 第22-24页 |
| 1.4.1 目的意义 | 第22页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 TaSNX1基因转化拟南芥 | 第24-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-32页 |
| 2.1.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1.2 主要仪器 | 第25页 |
| 2.1.1.3 主要试剂和耗材 | 第25页 |
| 2.1.1.4 培养基和溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.1.5 实验中所用引物 | 第26页 |
| 2.1.2 方法 | 第26-31页 |
| 2.1.2.1 TaSNX1基因的全长克隆 | 第26-27页 |
| 2.1.2.2 目的基因的回收和纯化 | 第27-28页 |
| 2.1.2.3 目的基因与T载体连接和转化 | 第28页 |
| 2.1.2.4 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第28-29页 |
| 2.1.2.5 阳性单克隆进行菌落PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.1.2.6 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.1.2.7 质粒DNA双酶切和连接 | 第30-31页 |
| 2.1.3 农杆菌转化拟南芥 | 第31-32页 |
| 2.1.3.1 野生型拟南芥的种植 | 第31页 |
| 2.1.3.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.1.3.3 重组重组质粒转化农杆菌及阳性克隆的筛选 | 第31-32页 |
| 2.1.3.4 农杆菌侵染拟南芥 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.2.1 TaSNX1植物过表达载体的构建及转化农杆菌 | 第32-35页 |
| 2.2.1.1 TaSNX1基因的全长克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.1.2 连接T载体后菌落PCR和双酶切验证 | 第33-34页 |
| 2.2.1.3 TaSNX1测序结果分析 | 第34页 |
| 2.2.1.4 重组表达载体菌落PCR和双酶切验证 | 第34-35页 |
| 2.2.2 TaSNX1::GFP转基因拟南芥的筛选 | 第35-37页 |
| 2.2.2.1 抗生素筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.2.2 转基因拟南芥基因水平上CaMV35s PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 TaSNX1原核表达载体的构建及蛋白诱导表达 | 第38-48页 |
| 3.1 材料 | 第38-40页 |
| 3.1.1 常规菌种 | 第38页 |
| 3.1.2 载体 | 第38页 |
| 3.1.3 试剂 | 第38页 |
| 3.1.4 实验所用到的引物: | 第38-39页 |
| 3.1.5 蛋白诱导相关溶液的配制 | 第39-40页 |
| 3.2 方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 PET32a-TaSNX1原核表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.1.1 TaSNX1基因的全长克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.1.2 目的基因的回收和纯化 | 第41页 |
| 3.2.1.3 目的基因与T载体连接、转化以及鉴定 | 第41页 |
| 3.2.1.4 质粒提取 | 第41页 |
| 3.2.1.5 质粒DNA双酶切 | 第41页 |
| 3.2.1.6 目的片段的回收和连接 | 第41页 |
| 3.2.1.7 连接产物转化和阳性单克隆的鉴定 | 第41页 |
| 3.2.1.8 BL21感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.1.9 pET32a-TaSNX1重组质粒的转化和鉴定 | 第42页 |
| 3.2.2 蛋白诱导表达 | 第42-44页 |
| 3.2.2.1 IPTG诱导 | 第42页 |
| 3.2.2.2 表达蛋白纯化检测 | 第42页 |
| 3.2.2.3 蛋白SDS-PAGE电泳 | 第42-44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-47页 |
| 3.3.1 pET32a-TaSNX1原核表达载体构建 | 第44-47页 |
| 3.3.1.1 TaSNX1基因全长克隆 | 第44页 |
| 3.3.1.2 连接T载体后菌落PCR和双酶切验证 | 第44-45页 |
| 3.3.1.3 TaSNX1重组载体菌落PCR | 第45-46页 |
| 3.3.1.4 pET32a-TaSNX1蛋白的诱导 | 第46-47页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 低LOX酶活转基因小麦的筛选和检测 | 第48-56页 |
| 4.1 材料、试剂和仪器 | 第48-49页 |
| 4.1.1 转基因小麦材料 | 第48页 |
| 4.1.2 试剂和仪器 | 第48页 |
| 4.1.3 基因组合和转基因小麦简称 | 第48-49页 |
| 4.1.4 实验所用到引物 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 4.2.1 小麦基因组DNA的提取 | 第49页 |
| 4.2.2 目的基因和标记基因进行PCR扩增 | 第49-50页 |
| 4.2.3 脂肪酸氧化酶的测定 | 第50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-54页 |
| 4.3.1 转基因小麦株高分析 | 第50-51页 |
| 4.3.2 转基因小麦千粒重分析 | 第51-52页 |
| 4.3.3 转基因小麦分蘖数分析 | 第52页 |
| 4.3.4 转基因小麦酶活测定 | 第52-53页 |
| 4.3.5 转基因小麦PCR检测筛选 | 第53-54页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第54-56页 |
| 4.4.1 结果 | 第54-55页 |
| 4.4.2 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
