| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 猪痘病毒及其作为载体的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 猪痘病毒概述 | 第13页 |
| 1.1.2 猪痘病毒的分子生物学特性 | 第13-15页 |
| 1.1.3 猪痘病毒作为载体的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 兔病毒性出血症病毒及其疫苗的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.2.1 兔病毒性出血症病毒概述 | 第16-17页 |
| 1.2.2 兔病毒性出血症分子生物学特性 | 第17-19页 |
| 1.2.3 兔病毒性出血症病毒疫苗研究进展 | 第19-22页 |
| 第二章 兔病毒性出血症病毒VP60基因的克隆表达 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和毒株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂、培养基的配制 | 第22-24页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 RHDV核酸的提取 | 第25页 |
| 2.2.2 VP60基因的RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.3 PCR产物纯化 | 第26页 |
| 2.2.4 VP60基因的克隆 | 第26-28页 |
| 2.2.5 重组表达载体pET-32a(+)-VP60的构建 | 第28页 |
| 2.2.6 表达载体pET-32a(+)-VP60的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.2.7 包涵体的纯化 | 第29页 |
| 2.2.8 重组蛋白His-VP60的反应原性检测 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-34页 |
| 2.3.1 VP60基因的PCR扩增结果 | 第29页 |
| 2.3.2 重组质粒pGEM-T-VP60的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.3 VP60基因测序 | 第30-32页 |
| 2.3.4 VP60基因序列分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 重组质粒pET-32a(+)-VP60双酶切鉴定 | 第33页 |
| 2.3.6 诱导表达和融合蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.7 重组蛋白反应原性检测结果 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.4.1 RHDV VP60基因的序列测定与分析 | 第34-35页 |
| 2.4.2 VP60基因的原核表达 | 第35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 以绿色荧光蛋白为筛选标记构建TK基因缺失猪痘病毒 | 第36-49页 |
| 3.1 材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 细胞和病毒 | 第36页 |
| 3.1.3 主要生化试剂 | 第36页 |
| 3.1.4 试剂、培养基的配制 | 第36-37页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.6 P11启动子序列 | 第37-38页 |
| 3.1.7 引物设计 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 猪痘病毒的培养 | 第38-39页 |
| 3.2.2 病毒DNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.3 TK1、TK2和P11-egfp基因的PCR扩增 | 第39页 |
| 3.2.4 转移载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.2.5 转染质粒的提取及浓度测定 | 第41页 |
| 3.2.6 转染 | 第41-42页 |
| 3.2.7 重组病毒的纯化 | 第42页 |
| 3.2.8 重组病毒的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.9 重组病毒的遗传稳定性测定 | 第43页 |
| 3.3 结果 | 第43-47页 |
| 3.3.1 重组臂和egfp基因的PCR扩增结果 | 第43页 |
| 3.3.2 转移载体pSWE11的酶切鉴定 | 第43-45页 |
| 3.3.3 转染结果 | 第45页 |
| 3.3.4 重组病毒的纯化与PCR鉴定 | 第45-47页 |
| 3.3.5 重组病毒的遗传稳定性分析 | 第47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.4.1 猪痘病毒TK基因作为外源基因插入位点 | 第47页 |
| 3.4.2 绿色荧光蛋白作为筛选标记 | 第47页 |
| 3.4.3 P11启动子 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 以LacZ基因为筛选标记构建TK基因缺失猪痘病毒 | 第49-58页 |
| 4.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 质粒和菌株 | 第49页 |
| 4.1.2 细胞和病毒 | 第49页 |
| 4.1.3 主要生化试剂 | 第49页 |
| 4.1.4 试剂、培养基的配制 | 第49页 |
| 4.1.5 仪器设备 | 第49-50页 |
| 4.1.6 P28启动子序列 | 第50页 |
| 4.1.7 引物设计 | 第50页 |
| 4.2 方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 P11-LacZ和P28-LacZ基因的PCR扩增 | 第50页 |
| 4.2.2 转移载体的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.3 转染质粒的提取及浓度测定 | 第51页 |
| 4.2.4 转染 | 第51页 |
| 4.2.5 重组病毒的纯化 | 第51-52页 |
| 4.2.6 重组病毒的PCR鉴定 | 第52页 |
| 4.2.7 重组病毒的遗传稳定性测定 | 第52页 |
| 4.3 结果 | 第52-56页 |
| 4.3.1 P11-LacZ和P28-LacZ基因的PCR扩增结果 | 第52-53页 |
| 4.3.2 转移载体pSWZ11和pSWZ28的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.3 重组病毒的纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.4 重组病毒rSWPV-Z11和rSWPV-Z28的PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.5 重组病毒的遗传稳定性分析 | 第56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 4.4.1 LacZ基因作为筛选标记 | 第56页 |
| 4.4.2 P11启动子与P28启动子 | 第56-57页 |
| 4.5 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 表达RHDV VP60蛋白重组猪痘病毒的构建 | 第58-69页 |
| 5.1 材料 | 第58-59页 |
| 5.1.1 质粒和菌株 | 第58页 |
| 5.1.2 细胞和病毒 | 第58页 |
| 5.1.3 主要生化试剂 | 第58页 |
| 5.1.4 试剂、培养基的配制 | 第58-59页 |
| 5.1.5 仪器设备 | 第59页 |
| 5.1.6 P7.5启动子序列 | 第59页 |
| 5.1.7 引物设计 | 第59页 |
| 5.2 方法 | 第59-62页 |
| 5.2.1 P7.5启动子、P7.5-VP60和P28-VP60基因的PCR扩增 | 第59-60页 |
| 5.2.2 转移载体的构建 | 第60-61页 |
| 5.2.3 转染质粒的提取及浓度测定 | 第61页 |
| 5.2.4 转染 | 第61页 |
| 5.2.5 重组病毒的纯化 | 第61页 |
| 5.2.6 重组病毒的PCR鉴定 | 第61页 |
| 5.2.7 重组病毒的Western blotting分析 | 第61-62页 |
| 5.2.8 重组病毒的遗传稳定性测定 | 第62页 |
| 5.2.9 重组病毒的超薄切片观察 | 第62页 |
| 5.3 结果 | 第62-67页 |
| 5.3.1 P7.5启动子、P7.5-VP60和P28-VP60基因的扩增结果 | 第62-63页 |
| 5.3.2 重组载体pSWE11-7.5V和pSWE11-28V的酶切验证 | 第63-65页 |
| 5.3.3 重组病毒rSWPV-E11-7.5V和rSWPV-E11-28V的PCR鉴定 | 第65-66页 |
| 5.3.4 重组病毒的遗传稳定性分析 | 第66页 |
| 5.3.5 重组病毒的Western blotting分析 | 第66页 |
| 5.3.6 重组病毒的超薄切片观察 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-68页 |
| 5.5 小结 | 第68-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
