| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩写词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 猪痘病毒研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 猪痘病毒的形态学及理化特性 | 第12页 |
| 1.1.2 猪痘病毒的理化特性 | 第12页 |
| 1.1.3 猪痘的发病概况 | 第12-14页 |
| 1.1.4 猪痘病毒分子生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.5 猪痘病毒作为载体的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 猪圆环病毒2型研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.1 猪圆环病毒2型病原学 | 第16-17页 |
| 1.2.2 猪圆环病毒2型基因结构与功能 | 第17页 |
| 1.3 猪圆环病毒2型疫苗研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 灭活苗 | 第17页 |
| 1.3.2 弱毒疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.3 基因工程苗 | 第18-19页 |
| 第二章 猪痘病毒JX-20G株的分离与鉴定 | 第19-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病料及细胞株 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂及配制 | 第19页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第19-20页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 猪痘病毒的分离 | 第20页 |
| 2.2.2 猪痘病毒分离毒株的鉴定 | 第20-22页 |
| 2.3 结果 | 第22-28页 |
| 2.3.1 猪痘病毒的分离 | 第22-23页 |
| 2.3.2 猪痘病毒的鉴定 | 第23页 |
| 2.3.3 猪痘病毒基因序列及推导的氨基酸序列同源性分析 | 第23-24页 |
| 2.3.4 猪痘病毒基因与其它痘病毒属基因的同源基因进化关系 | 第24-27页 |
| 2.3.5 病毒粒子的电镜观察 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.4.1 猪痘病毒的PK15细胞培养特性 | 第29页 |
| 2.4.2 猪痘病毒JX-20G株序列分析 | 第29页 |
| 2.4.3 猪痘病毒JX-20G株病毒粒子的电镜观察 | 第29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 猪圆环病毒2型全基因组克隆及序列分析 | 第30-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 质粒、菌株和毒株 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第30-31页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第31页 |
| 3.1.5 引物设计 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 病毒DNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.2 PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.3 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 3.2.4 连接 | 第32页 |
| 3.2.5 转化 | 第32页 |
| 3.2.6 PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.7 分离毒株的同源性及进化分析 | 第33页 |
| 3.3 结果 | 第33-37页 |
| 3.3.1 PCV2型全基因组的PCR结果 | 第33页 |
| 3.3.2 PCV2全基因及部分主要基因序列同源性分析 | 第33-35页 |
| 3.3.3 PCV2 ORF2基因推导的氨基酸序列分析 | 第35-36页 |
| 3.3.4 PCV2及PCV2 ORF2基因遗传进化树分析 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 表达PCV2衣壳蛋白重组猪痘病毒的构建 | 第38-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-40页 |
| 4.1.1 细胞和病毒 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂及配制 | 第38-39页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 4.1.4 P11、P7.5和P28启动子序列 | 第39-40页 |
| 4.1.5 引物设计 | 第40页 |
| 4.2 pSWE 1-28C、pSWE11-7.5C载体构建实验方法 | 第40-44页 |
| 4.2.1 SWPV的培养 | 第40-41页 |
| 4.2.2 病毒DNA的提取 | 第41页 |
| 4.2.3 TK1、TK2和P11-egfp基因的PCR扩增 | 第41页 |
| 4.2.4 P7.5启动子、P7.5-Cap和P28-Cap片段的PCR扩增 | 第41页 |
| 4.2.5 转移载体的构建 | 第41-42页 |
| 4.2.6 pSWE11-28C载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.2.7 pSWE11-7.5C载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.3 pSW-E11-28C、pSW-E11-7.5C重组质粒转染及重组病毒纯化 | 第44-46页 |
| 4.3.1 转染质粒的提取及浓度测定 | 第44页 |
| 4.3.2 转染过程 | 第44页 |
| 4.3.3 重组病毒的纯化 | 第44-45页 |
| 4.3.4 重组病毒的PCR鉴定 | 第45页 |
| 4.3.5 重组病毒的Western blotting分析 | 第45页 |
| 4.3.6 重组病毒超薄切片观察 | 第45-46页 |
| 4.3.7 重组病毒的遗传稳定性实验 | 第46页 |
| 4.4 实验结果 | 第46-54页 |
| 4.4.1 重组臂和egfp基因的扩增结果 | 第46页 |
| 4.4.2 P7.5-Cap、P28-Cap和P7.5启动子基因的PCR结果 | 第46-47页 |
| 4.4.3 转移载体pSWE11的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4.4 重组载体pSWE11-28C和pSWE11-7.5C的酶切验证 | 第48-50页 |
| 4.4.5 转染 | 第50页 |
| 4.4.6 重组病毒的纯化 | 第50-51页 |
| 4.4.7 重组病毒的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| 4.4.8 重组病毒的Western blotting分析 | 第52-53页 |
| 4.4.9 重组病毒超薄切片观察 | 第53-54页 |
| 4.4.10 重组病毒的遗传稳定性实验 | 第54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5.1 猪痘病毒TK基因作为外源片段插入位点 | 第54页 |
| 4.5.2 筛选基因的选择 | 第54页 |
| 4.5.3 表达Cap蛋白重组猪痘病毒作为活载体疫苗 | 第54-55页 |
| 4.6 小结 | 第55-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附件 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
