| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 蓝细菌 | 第10-11页 |
| 1.1.1 蓝细菌概述 | 第10页 |
| 1.1.2 蓝细菌营养方式 | 第10-11页 |
| 1.1.3 蓝细菌作用及代谢产物 | 第11页 |
| 1.2 蓝细菌模式菌株 | 第11-16页 |
| 1.2.1 集胞藻PCC 6803 | 第11-13页 |
| 1.2.2 聚球藻PCC 7002 | 第13-14页 |
| 1.2.3 聚球藻PCC 7942 | 第14-15页 |
| 1.2.4 细长聚球藻UTEX 2973 | 第15-16页 |
| 1.3 蓝细菌合成生物乙醇的概述 | 第16-21页 |
| 1.3.1 蓝细菌研究生物乙醇的背景和意义 | 第16-17页 |
| 1.3.2 蓝细菌中生物乙醇合成的代谢途径 | 第17-18页 |
| 1.3.3 蓝细菌生物乙醇合成途径关键酶的概述 | 第18-19页 |
| 1.3.4 蓝细菌合成乙醇的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4 本研究的目的和实验设计 | 第21-22页 |
| 2 探究集胞藻PCC 6803 乙醇合成途径的限速酶 | 第22-42页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验需要配置的溶液 | 第23-25页 |
| 2.2.1 配置培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.2 配置DNA琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第24页 |
| 2.2.3 配置聚丙烯酰氨凝胶电泳相关溶液 | 第24-25页 |
| 2.2.4 配置本章节所用到的抗生素及分装 | 第25页 |
| 2.2.5 配置 5M NaCl | 第25页 |
| 2.2.6 配置 1g/L乙醇标样 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-34页 |
| 2.3.1 制备DH5α 感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.3.2 提取蓝细菌基因组DNA | 第26页 |
| 2.3.3 试剂盒提取质粒、纯化片段 | 第26-28页 |
| 2.3.4 集胞藻PCC6803的培养条件 | 第28页 |
| 2.3.5 聚合酶链式反应PCR（Polymerase Chain Reaction） | 第28-29页 |
| 2.3.6 加A、补平、连接、转化 | 第29-30页 |
| 2.3.7 菌株冻存 | 第30页 |
| 2.3.8 测定乙醇 | 第30-31页 |
| 2.3.9 集胞藻Synechocystis sp. PCC6803的转化 | 第31页 |
| 2.3.10 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第31-32页 |
| 2.3.11 蓝细菌总蛋白的提取和定量 | 第32页 |
| 2.3.12 免疫蛋白印迹（Western blot） | 第32-33页 |
| 2.3.13 丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶酶活测定 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-40页 |
| 2.4.1 质粒构建 | 第34-37页 |
| 2.4.2 菌株Syn-YQ4构建 | 第37-38页 |
| 2.4.3 蛋白免疫印迹 | 第38-39页 |
| 2.4.4 酶活测定 | 第39-40页 |
| 2.4.5 发酵实验 | 第40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-42页 |
| 3 提高聚球藻PCC 7002 乙醇合成菌株中slr1192表达量 | 第42-64页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.1 材料 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 仪器 | 第43页 |
| 3.2 实验需要配置的溶液 | 第43-45页 |
| 3.2.1 配置LB培养基 | 第43页 |
| 3.2.2 配置DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第43页 |
| 3.2.3 配置 0.8%琼脂糖凝胶 | 第43页 |
| 3.2.4 配置聚球藻PCC 7002 medium A | 第43-44页 |
| 3.2.5 配置本章节所用到的抗生素及分装 | 第44-45页 |
| 3.2.6 配置 5M NaCl | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.3.1 制备DH5α 感受态细胞 | 第45页 |
| 3.3.2 提取蓝细菌基因组DNA | 第45页 |
| 3.3.3 试剂盒提取质粒（Omega） | 第45页 |
| 3.3.4 试剂盒过柱子纯化片段（Omega） | 第45页 |
| 3.3.5 试剂盒切胶回收目的片段（Omega） | 第45页 |
| 3.3.6 聚球藻PCC7002的培养方法 | 第45页 |
| 3.3.7 聚合酶链式反应PCR（Polymerase Chain Reaction） | 第45页 |
| 3.3.8 大肠杆菌细胞的化学转化 | 第45页 |
| 3.3.9 加A反应（PCR扩增片段平末端添加d ATP） | 第45页 |
| 3.3.10 连接反应 | 第45页 |
| 3.3.11 补平（DNA粘性末端平端化） | 第45-46页 |
| 3.3.12 转化子鉴定 | 第46页 |
| 3.3.13 菌株冻存 | 第46页 |
| 3.3.14 测定乙醇 | 第46页 |
| 3.3.15 处理硝酸纤维素膜 | 第46页 |
| 3.3.16 聚球藻PCC 7002 的转化方法 | 第46页 |
| 3.3.17 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第46页 |
| 3.3.18 蓝细菌总蛋白的提取和定量 | 第46页 |
| 3.3.19 免疫蛋白印迹（Western Blot） | 第46页 |
| 3.3.20 丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶酶活测定 | 第46页 |
| 3.3.21 胞内胞外有机酸的提取和测定 | 第46-47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-62页 |
| 3.4.1 质粒构建 | 第48-51页 |
| 3.4.2 藻株构建 | 第51-54页 |
| 3.4.3 聚球藻PCC 7002中分别用强弱启动子控制slr1192和PDCzm表达分析 | 第54-57页 |
| 3.4.4 聚球藻PCC 7002工程菌株Syn-1+2PA中A0027位点过表达一份slr1192 | 第57-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 4 在聚球藻UTEX 2973 中构建产乙醇菌株 | 第64-76页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 | 第64-65页 |
| 4.1.1 材料 | 第64页 |
| 4.1.2 试剂 | 第64页 |
| 4.1.3 仪器 | 第64-65页 |
| 4.2 实验需要配置的溶液 | 第65页 |
| 4.2.1 配置LB液体培养基 | 第65页 |
| 4.2.2 配置DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第65页 |
| 4.2.3 配置 0.8%琼脂糖凝胶 | 第65页 |
| 4.2.4 配置聚球藻UTEX 2973 培养基BG11 | 第65页 |
| 4.2.5 配置本章节所用到的抗生素及分装 | 第65页 |
| 4.2.6 配置 5M NaCl | 第65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-67页 |
| 4.3.1 制备感受态细胞 | 第65-66页 |
| 4.3.2 提取蓝细菌基因组DNA | 第66页 |
| 4.3.3 试剂盒提取质粒（Omega） | 第66页 |
| 4.3.4 试剂盒过柱子纯化片段（Omega） | 第66页 |
| 4.3.5 试剂盒切胶回收目的片段（Omega） | 第66页 |
| 4.3.6 聚球藻UTEX 2973 的培养方法 | 第66页 |
| 4.3.7 聚合酶链式反应PCR（Polymerase Chain Reaction） | 第66页 |
| 4.3.8 大肠杆菌细胞的化学转化 | 第66页 |
| 4.3.9 连接反应 | 第66页 |
| 4.3.10 补平（DNA末端平端化） | 第66页 |
| 4.3.11 转化子鉴定 | 第66页 |
| 4.3.12 菌株冻存 | 第66页 |
| 4.3.13 测定乙醇 | 第66页 |
| 4.3.14 处理硝酸纤维素膜 | 第66-67页 |
| 4.3.15 聚球藻UTEX 2973 的转化方法 | 第67页 |
| 4.3.16 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第67页 |
| 4.3.17 蓝细菌总蛋白的提取和定量 | 第67页 |
| 4.3.18 免疫蛋白印迹（Western Blot） | 第67页 |
| 4.3.19 丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶酶活测定 | 第67页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第67-74页 |
| 4.4.1 质粒构建 | 第68-71页 |
| 4.4.2 藻株构建 | 第71-73页 |
| 4.4.3 发酵实验 | 第73-74页 |
| 4.4.4 酶活测定 | 第74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第88-89页 |
